植物组织培养校本教材123 - 图文(9)

在试管苗增殖到一定数量后，就要使部分苗分流进入壮苗与生根阶段。若不能将培养物大量转移到生根培养基上，一方面就会使久不转移的苗子发黄老化，或因过分拥挤而致使无效苗增多，最后被迫淘汰许多材料；另一方面，试管苗是在无菌、有营养供给、适宜光照、温度和几乎100%相对湿度的环境中生长的，一旦出瓶，移栽环境发生了剧烈的变化而不利于其生长；同时由于试管苗幼嫩，环境中的杂菌极易侵染，导致试管苗死亡。为了适应移栽后的较低的湿度以及较高的光强，完成试管苗从“异养”到“自养”的转变，需要有一个适应过程。 3.5.4.1 壮苗培养

在继代培养过程中，细胞分裂素浓度的增加有助于增殖系数的提高。但伴随着增殖系数的提高，增殖的芽往往出现生长势减弱，不定芽短小、细弱，无法进行生根培养的现象；即使能够生根，移栽成活率也不高，必须经过壮苗培养。壮苗培养时，可将生长较好的芽分成单株培养，而将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。

通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配比，可以同时满足增殖和壮苗的不同要求。如在杜鹃快繁的研究中发现，ZT/IAA或ZT/IBA的比值升高，芽的繁殖系数也随之增加，但壮苗效果却降低。高浓度的生长素和低浓度的细胞分裂素的组合有利于形成壮苗。因此，在以丛生芽方式进行增殖时，适当降低培养基中BA等细胞分裂素的浓度，并增加NAA等生长素的浓度，就能达到壮苗培养的目的。在实际生产中，我们一般用较低浓度的细胞分裂素与生长素组成合理的比列，将有效增殖系数控制在3.0-5.0，以实现增殖和壮苗的双重目的。 3.5.4.2 生根培养

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（1）试管内生根

试管内生根是将成丛的试管苗分离成单苗，转接到生根培养基上，在培养容器内诱导生根的方法。试管苗生根的优劣主要体现在根系质量（粗度、长度）和根系数量（条数）吸收方面。不仅要求不定根比较粗壮，更重要的是要有较多的毛细根，以扩大根系的吸收面积，增强根系的吸收能力，提高移栽成活率。根系的长度不宜太长，在粗而少与细而多之间，可能以后者较好。

在生根阶段对培养基成分和培养条件可进行调整，减少试管苗对异养条件的依赖，逐步增强光合作用的能力。对于大多数物种来说，诱导生根需要有适当的生长素，其中最常用的是NAA和IBA，浓度一般为

0.1-10.0mg/L。但唐菖蒲、水仙和草莓等组培苗很容易在无生长素的培养基上生根。

一般情况下矿质元素浓度较高时有利于茎、叶生长，较低时有利于生根。生根培养基中无机盐和蔗糖浓度减少一半，光照强度由原来的500-1000lx提高到1000-5000lx，能刺激小植株自身进行光合作用制造有机物，以便由异养型向自养型过渡。在这种条件下，植物能较好的生根，对水分胁迫和疾病的抗性也会有所增强，植株可能表现出生长迟缓和较轻微的失绿，但生产实践证明，这样的幼苗，要比在低光强条件下的较绿较高的幼苗移栽成活率高。

生根阶段采用自然光照比灯光照明所形成的试管苗更能适应外界环境条件。培养基中添加活性炭有利于提高生根苗质量。在樱花生根培养基中加入0.1%-0.2%活性炭后，试管苗不仅生长健壮，无愈伤组织，而且根系较长、白色、有韧性，移栽后新根发生快，质量好，成活率高。

（2）试管外生根

有些植物种类在试管中难以生根，或有根但与茎的维管束不相通，或根与茎联系差，或有根而无根毛，或吸收功能极弱，移栽后不宜成活，这就需要采用试管外生根法。试管外生根是将已经完成壮苗培养的小苗，用一定浓度生长素或生根粉浸蘸处理，然后栽入疏松透气的基质中。大花蕙兰、非洲菊、苹果、猕猴桃、葡萄和毛白杨等均有试管外生根成功的报道。试管外生根也是一种降低生产成本的有效措施，不仅可以减少无菌操作的工时消耗，而且减少了培养基制备材料与能源消耗。

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3.5.4.3 生根方法

1）适当延长在增殖培养基中的培养时间，直至根系长出并达到一定长度。

2）采用专门的生根培养基进行培养，一般为1/2或1/4的基础培养基。 3）增大NAA或IAA等生长素的浓度来促进生根。 4）切割健壮的试管苗在适宜的基质中进行扦插生根。

5）控制初始的培养基中生长调节剂浓度，一次性获得生根试管苗（只适用于个别植物）。 3.5.4 炼苗和移栽

移栽前将装有健壮试管苗的培养瓶，从培养室中移到室外锻炼1-2天后，把瓶子打开，用镊子取出，清水洗去根部的培养基，转入适宜的基质中。

3.3.4 移栽和管理

经过炼苗后，可以将试管苗移到先保湿后敞开的空间中去，移栽方式有大田移栽和容器移栽。大田移栽是对于一些木本药用植物，炼苗后先经过容器移栽，然后转移到大田中。容器移栽时将驯化的试管苗移栽到穴盘等育苗容器中。具体方法：

从瓶中取出试管苗，在20℃左右的温水中浸泡10min并换水2次，将根部的培养基洗掉，栽入装有经过消毒处理基质的穴盘中，喷淋透水及杀菌药，放臵于大棚中。 注意事项：

①从瓶中取苗时，手要轻，不能用力过猛，防止扯断苗根。

②试管苗清洗时，一只手轻轻捏住苗的根茎上部，另一只手轻揉苗根，将附于其上的琼脂块和松散的愈伤组织清理掉；如果根过长，可以用锋利的剪刀剪掉一段，蘸生长素（50mg/L的吲哚丁酸或萘乙酸）或生根粉后移入苗盘。清洗一定要干净，否则残留的培养基会导致霉菌污染。

③移栽基质以疏松、排水性和透气性良好都为宜，最好使用理化性状良好的复合基质。但应当注意基质的彻底消毒。

④已经植入育苗盘的试管苗，应在清洁又能控温的条件下生长，空气湿度要大，如果光照强度过大应该进行适当遮荫。

⑤植苗入盘的时间，最好选在无风阴湿的天气，对于一些移栽成活率低的植物，

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移栽时的空气湿度和光照条件是重要的影响因子。

⑥移栽时先在营养钵或穴盘中装入基质至1/4处，左手轻拿试管苗，右手将苗根均匀地分布于营养钵中。移栽约1周后，应该进行适量的叶面追肥，最好使用1/4或1/2MS培养基大量元素的混合游，可以是按一定比例配制的稀磷酸二氢钾和尿素溶液。

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第四章 实训项目

实训一组培室设备参观及器皿的洗涤和灭菌

一、目的要求：

1．通过参观，了解组织培养室的几个主要组成部分和各部分应有的基本设备以及有关仪器的用途与功能。

2．通过实际操作，学会洗涤剂的配制和各种器皿的清洗和灭菌方法。 二、实验内容

了解组培室的结构及主要设备的用途和性能是十分必要的，总体上的了解有利于以后各实验的进行以及正确的使用各种仪器和设备。植物组织培养是一项十分细致的工作，为了保证植物外植体不受污染，第一关就是要对各种器皿进行清洗和消毒，使它们保持无菌状态，做这些工作同样有一套科学的方法和需要熟练的技巧，因此每个学生必须学好这套基本功。 三、实验原理

实验仪器的清洗、消毒和灭菌是组织培养成功的关键所在，是外植体免受污染的前提。由于灭菌剂的种类不同，所以选择消毒剂既要考虑良好的消毒、杀菌作用，同时易被蒸馏水冲洗掉。 四、实验仪器与材料：

高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、酸度计、空调机、万分之一天平、电炉、玻璃器皿（试管、三角瓶、移液管、漏斗、烧杯、容量瓶、试剂瓶、量筒酒精灯），以及镊子、解剖刀、解剖针、手术剪，肥皂、洗衣粉、重铬酸钾、浓硫酸等。 五、方法和步骤：

首先在老师带领下参观组培室，并听取讲 …… 此处隐藏：1799字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……