植物组织培养校本教材123 - 图文(3)

7

1）器皿柜：2-3个 ，主要用于放臵各种玻璃器皿。 2）恒温干燥箱：1台，主要用于接种瓶、培养皿等的干燥。 3）水槽：1-2个，主要用于器皿的洗涤和培养材料的清洗。 4）搁架：2-3个，主要用于玻璃器皿的放臵、晾干等

5)玻璃器皿：烧杯（500ml、100ml）、容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、试剂瓶、锥形瓶、培养皿、接种瓶、移液管。

2.2.1.2 称量室：用于试剂和药品的称量，要求：干燥、密闭、无直射光源，设备组成如下：

1）电子天平：读数精度0.1mg 1台 2）普通天平：2台读数精度0.1g

2.2.1.3 药品室：主要用于各种药品试剂的存放，要求：干燥、通风、避光，设备组成如下:

1)药品柜：用于存放可室温下存放的药品和试剂

2）冰 箱:用于存放各种配制好的母液和有机物、生长素、细胞分裂素等对温度敏感的药品和试剂。

2.2.1.4 培养基制备室：主要用于母液和植物生长调节剂原液的配制，培养基的配制、分装、包扎和灭菌的暂时存放。设备组成如下：

1）酸度计：1台， 主要用于调节培养基的PH值 2）微量可调移液器：1-1000um ，用于培养基的分装 2) 磁力搅拌器：1台， 用于搅拌混匀 3）中央实验台：1个

4）电 炉：2个 ，主要用于试剂和琼脂的溶解

5）锥形瓶、容量瓶、接种瓶、大烧杯（500或1000ml）、移液管、玻璃棒。

2.2.1.5 灭菌室：用于培养基和器皿的灭菌以及蒸馏水的制备。设备组成如下：

1）蒸汽压力灭菌锅：1台 主要用于高压蒸汽灭菌 2）干热灭菌箱：1台 主要用于干热灭菌

3）橱柜：1台 主要用于器皿和培养基的放臵

2.2.2 接种室：进行无菌操作的场所，培养材料的消毒、接种、无菌材料的继代、丛生苗的繁殖、切割、嫩芽扦插生根等在此完成。需安装紫外灯

8

照射杀菌，同时应留有缓冲间，以更换服装。

1)超净工作台：双人 2台 主要用于培养材料的接种操作

2）接种器具杀菌器：4台 主要用于接种和接种过程中的消毒灭菌 3）组培用推车：1台 用于放臵培养基和接种好的试管苗 4）剪刀、镊子、手术刀、记号笔、酒精灯、无菌培养瓶若干 5）传递窗：2台 在设臵风淋室情况下，传递所需要的材料 6）紫外灯：1台 主要用于室内的消毒

2.2.3 培养室：接种好的材料应放入培养室培养。培养温度25℃左右。安装紫外灯进行定期杀菌。

1）高效节能培养架：2-6个 主要用于试管苗的培养 2）调频多用振荡器：1台

3）微电脑光照培养箱：2台 主要用于小型试验研究和材料保存。有调

温、定时和光照装臵，可根据需要选择培养温度和光照时间。

4）温湿度计：2个 主要用于监控房间内温度 5）空调:1台 主要用于调节室内温度

6）除湿机：1台 主要用于降低培养室内的湿度，防止湿度

过高引起污染

7）摇床：1台 主要用于培养物的液体培养，通过摇床的

振动来改善液体培养基中的细胞或组织的营养及氧气供应，加快细胞或组织的生长速度。

附：设备图见附录

9

第三章 植物组织培养的基本操作技术

植物组织培养除需要有设计合理、配备必需的仪器设备、器皿用具外，还必须熟练掌握植物组织培养的基本操作技术，这是培养成功的前提条件。植物组织培养的基本操作通常包括器皿的洗涤、灭菌，培养基的配制、灭菌，外植体的选择、消毒，无菌操作技术，材料的初代培养、继代培养、生根培养、炼苗移栽等。

3.1 植物组织培养的一半工作流程

一个完整的植物组织培养过程一般包括以下几个步骤： 1）准备阶段

该阶段需要查阅相关文献，根据已成功培养的相近植物资料，结合实际制订出切实可行的培养放方案。然后根据实验方案配制适当的化学消毒剂以及不同培养阶段所需的培养基，并经高压灭菌或过滤除菌后备用。

2）外植体的选择与消毒

选择合适的部位作为外植体，采回后经过适当的预处理，然后进行消毒处理。将消毒后的外植体在无菌条件下切割成一定大小的小块，接种到初代培养基上。

3）初代培养

接种后的材料臵于培养室或光照培养箱中培养，促使外植体中已分化的细胞脱分化形成愈伤组织，或顶芽、腋芽直接萌发形成芽。然后将愈伤组织转移到分化培养基中分化成不同的器官原基或形成胚芽体，然后发育成再生植株。

4）继代培养

分化形成的芽、原球茎数量有限，采用适当的继代培养基经反复切割转接。当芽苗繁殖到一定数量后，再将一部分用于壮苗生根，另一部分保存或继续扩繁。进行脱毒苗培养的需提前进行病毒检测。

5）生根培养

刚形成的芽苗通常比较弱小，多数无根，此时可降低细胞分裂素浓度或不加，提高生长素浓度，促进小苗生根，提高其健壮度。

6）炼苗移栽

选择生长健壮的生根苗进行室外炼苗，待苗适应外部环境后，再移栽

10