植物组织培养校本教材123 - 图文(12)

实训三 植物组织培养整体方案设计操作

一、目的要求

通过前面项目的学习，通过查阅资料，选择合适的植物材料进行植物组织培养方案设计，要求方案设计合理，可操作性强。

二、实训内容

1、选择合适的植物材料 2、根据选择的材料查阅相关资料

3、根据所查阅资料的情况选择合适的培养基配方 4、以组为单位进行方案的整体设计 三、具体要求

1、选择的植物材料简单常见、后续可操作性强

2、要有完整的（包括植物培养的各个阶段）培养基和生长调节剂配方 3、各组所选择的植物材料将作为后续项目操作的内容 4、要有合理的方案设计报告

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实训四 常见花卉植物的初代培养

一、目的要求：

1、掌握植物组织培养培养基的配制、灭菌和配方的选择 2、掌握植物材料的消毒和灭菌处理方法 3、掌握组织培养的无菌操作技术 4、学会正交试验方法 二、材料用具:

1、带腋芽的植物茎段或叶片、茎尖等

2、超净工作台、剪刀、镊子、解剖针、解剖刀、广口瓶、烧杯、培养皿、

酒精灯、升汞、次氯酸钠、酒精、无菌水、培养基、记号笔、纱布、酒精棉球、等材料。

3、基础培养基、生长调节剂(根据不同植物材料选择)、无菌水、70%的

酒精、0.2%的次氯酸钠、0.1%的升汞

三、方法步骤

1、培养基配制 按照配方配制好培养基并及时灭菌备用；

2、取材、选材 选择优良健壮五病虫害的植物植株，选取饱满的植物材

料，用自来水冲洗干净，在洗衣粉水中浸泡30min,然后用流水冲洗干净；

3、消毒 在超净工作台上用70%的酒精消毒20-30s，无菌水冲洗一次，

在0.2%的次氯酸钠中浸泡5-10min，用无菌水冲洗4-5次。

4、接种 根据所选择的植物材料，按照无菌操作的要求，将植物材料接

种到诱导培养基上。

5、培养 选择合适的培养温度24°，合理的光照强度，定期观察生长情

况。

四、实训报告

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每隔七天观察一次试管苗的生长情况，并做好记录（包括污染率、萌发时间、苗高、增殖系数、正交试验的对比情况等）并写出实训报告

萌发率=萌发的材料数/总接种的材料数*100% 繁殖系数=每瓶形成的有效苗数/接种苗数*100%

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实训五 试管苗的继代培养与转接

一、 目的要求：

熟练掌握培养基的制作过程，掌握试管苗的茎段转接过程。 二、仪器及试剂：

超净工作台及配套接种用具(无菌接种工具、酒精灯、酒精 棉球、70%酒精瓶，无菌培养皿、打火机等) 三、试验材料：

取培养的试管苗。选择长势好，高度达5cm以上的茎梢种苗或芽丛种苗。每个超净台配给2瓶种苗。 空白培养基： 准备事先做好的10瓶空白培养基。 四、操作步骤

1、配制继代培养培养基并做好灭菌备用

2.接种前4小时对接种室进行熏蒸，每个超净台取10ml左右甲醛液装入 瓶中，在超净台边加入5克左右高锰酸钾，立即放入超净台里；接种前20-30分钟接通电源，打开紫外灯和风机。

3．洗净双手，穿好专用实验服进入接种室，用酒精棉球擦试双手，台面及 接种工具等。

4．将酒精灯放在距超净台边缘约30cm，正对胸前处，注意以后的操作都要 在酒精灯的10cm半径范围内完成。点燃酒精灯，对剪子和镊子过火，先从头至尾过火，然后对尖端反复过火；将种苗瓶放在灯前偏左处；将空白培养基瓶放在灯前偏右处；将接种用培养皿放在距超净台边缘约15cm，正对胸前处，以利操作的方便进行。

5．打开原种瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到 培养皿里。对香石竹等茎梢可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。对草莓等没有茎、只有基生叶的种苗分离芽丛，最后均分离为1-2个芽，最好为1个芽。

每瓶接4—5个茎段或小芽，若放4株呈正方形分布。若放5株最后一株要放在正方形对角线交点处。接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶， 接种工具要放回酒精消毒瓶。

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如果技能熟练的话，可用悬接法，用镊子夹住试管苗的顶端一节，拔出瓶口， 剪断这一节，将茎段插入空白培养基中。对芽丛可提起一个芽丛的一个芽，用剪刀剪去其它部分，将单芽插入培养基里。

6. 接完一瓶原种后，可用酒精棉球擦拭双手，弃去含废弃物的培养皿，换用新的无菌培养皿，以防交叉感染。

7. 接完10瓶种苗后，写好标签，移出超净台，臵于塑料筐里，再接下一批。 8. 接种完毕，熄灭酒精灯，盖上酒精瓶，收拾净超净台面，先把种苗瓶移出， 然后将废物皿、空原种瓶、培养皿、接种工具等移出放到塑料筐里，带出接种室，清洗干净。

9. 接后的培养物转移到培养室进行培养。3天后，经常检查污染情况，及时清除培养瓶。 五、实训报告

观察并记录转接后植物的生长情况、污染率等。

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