植物组织培养校本教材123 - 图文(13)

实训六 植物的生根培养

一、实训目的

熟练掌握生根培养的各个技术环节，包括生根试管的接种，培养观察与对策等。 二、实训材料

转接后试管苗、空白生根培养基：准备事先做好的10瓶空白培养基。 三、试验仪器试剂

超净工作台及配套接种用具(无菌接种工具、酒精灯、酒精 棉球、70%酒精瓶，无菌培养皿、打火机等)。

四、实训内容及步骤 1.生根培养基的制作 2.生根试管苗的接种和培养。

3、实训步骤

生根培养基基配制时可配制1/2MS，另加NAA1－2，不要加入细胞分裂素类生 长调节物质。打开种苗瓶，对瓶口先外壁，后内壁过火。然后准备接种：先将种苗移到培养皿里。对植物材料等茎梢可切割茎段，剪时要茎节上部少留，节下部多留。每瓶可接4—5个茎段或小芽，接好后，瓶口和封口膜均要过火，扎口。每接完一瓶，接种工具要放回酒精消毒瓶。

培养时，注意观察生根情况，约20天后开始分化生根，以出现长度在1cm、洁白均匀整齐的不定根为佳。不要使根发生徒长现象。 五、思考和作业

1．生根培养基和其它培养基有什么区别？ 2．生出的不定根以什么标准较好？

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实训七 药用植物铁皮石斛的组织培养

一、目的要求：

练习铁皮石斛茎尖外植体的剥离、灭菌和接种等无菌的操作方法，熟悉铁皮石斛快速繁殖和获得无病毒植株的全过程。

二、实验内容

学习和掌握铁皮石斛茎尖剥离、灭菌和接种等基本操作。 三、实验原理

植物茎尖处于比较幼嫩的部位，其细胞具有旺盛的生命力，易于培养而获得成功。

茎尖培养根据其目的不同，取材的大小有较大的差异，较小的仅为十至几十微米的茎尖分生组织，较大的可利用几十毫米的茎尖甚至更大的芽，但一般讲茎尖愈小（小到50——100微米的生长点）培养难度就越大，有的需要一年或更长的时间才能成苗，茎尖越大培养越易获得成功。如果进行植物快速繁殖，则采用较大的茎尖，以带有叶原基的生长为宜，这样既能提高成活率，又能加快繁殖速度，如以脱毒为目的，则采用较小的茎尖，因为病毒在植株上的分布是不均匀，一般幼嫩的组织器官中病毒含量极低，以生长点含病毒最少，甚至不含病毒，所以进行脱毒种苗培养，应尽量采用极小的茎尖生长点进行培养，以获得脱毒苗。

四、实验仪器与材料

超净工作台、剪刀、镊子、解剖针、解剖刀、广口瓶、烧杯、培养皿、酒精灯、升汞、次氯酸钠、酒精、无菌水、培养基、记号笔、纱布、酒精棉球、铁皮石斛外植体等材料。

五、方法和步骤

1、选择品种性状典型的，生长健壮无病虫的铁皮石斛植株，取其已萌动的顶芽或腋芽，或剪下3~5cm生长的茎顶端，剥去大叶片，先在流水中冲流2~3小时，吸干水分，再在70%乙醇中浸半分钟，然后放入2%的次氯酸钠溶液中灭菌5分钟，用无菌水冲洗3~5次。

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2、在超净工作台上把灭菌的茎尖放在双筒解剖镜下剥去较小的叶片，根据不同目的，可取只带2~3个叶原基的生长点甚至不带叶原基的生长点，或带2~3片幼叶的茎尖。生长点剥离方法：在解剖镜下，一手用镊子夹住无菌的茎尖，一手用较细的解剖针剥掉生长点外围的叶片，直至达到晶莹发亮的光滑顶为止，然后用解剖刀仔细切取所需茎尖，随即接种在预先配制好的培养基上。

3、培养基：茎尖分化培养基：MS+BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L+3%蔗糖 茎尖培养对培养容器无特殊要求，一般以15cm〓20cm的试管，或50ml三角瓶为宜，每支试管装10ml培养基，每只三角瓶装25ml培养基，每管或每瓶接种一个茎尖。

4、培养：接种的茎尖臵于培养室内培养，温度25摄氏度〒2摄氏度，光照2000Lux,以日光灯为光源，每天照光10小时。 六、任务及分析

1、每人接种茎尖4个，要求二个剥至带2～3个叶原基的生长点。 2、定时观察记录：幼苗分化和生根情况。 3、试述利用茎尖培养为什么能够脱除病毒。

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实训八 药用植物的花药培养

一、目的要求

学习药用植物花药的采集、灭菌、接种、培养等一整套花药培养的具体方法。 二、实验内容

以药用植物的花药为外植体，掌握对花药的灭菌、接种、培养等的方法。 三、实验原理

花药培养是植物育种的一种有效方法，即用离体花药培养的方法，使其中的花粉发育成一个完整的植株，这种花粉植株的染色体数目为体细胞的一半，称为单倍体植物。通过这一途径获得单倍体后再使之加倍，就能得到纯合二倍体，从而为准确研究性状遗传规律和杂种优势的利用打下基础。

四、实验仪器与材料

不同药用植物的花药，纱布、塑料袋、三角瓶、70%酒精、冰箱、显微镜、醋酸洋红、载玻片、盖玻片、MS培养基的各种化学药品。各种灭菌、接种、培养用具和器皿等。

五、方法和步骤

1、镜检确定花粉发育期：本实验在培养前先采集处于适宜时期的花蕾利用醋酸洋红压片法进行镜检，选取适宜的花粉发育时期。

2、预处理：采集花蕾，用湿纱布包好放入塑料袋，臵于3~5摄氏度冰箱中处理7天左右。

3、培养基准备采用MS培养基+2，4-D 0.4mg/L+KIN 0.2mg/L+IAA 4mg/L+蔗糖3~8%。

4、花药灭菌及接种：接种前花蕾经0.1%升汞灭菌10~15分钟，然后用无菌水冲洗3~5次，在无菌条件下取出花药进行接种，注意不要破坏花药，每瓶接种20~30个花药。

5、诱导培养：将培养瓶臵于温度25~30%，光强1500~2000Lux,每天光照相馆0小时的培养室中，诱导形成体胚或愈伤组织。

6、分化及再生：将胚状体或愈伤组织及时转入分化培养基，即在MS培养基中加入6—BA。

六、后续任务 定时观察：胚状体和愈伤组织的分化情况。

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实训九 试管苗的驯化移栽

一、目的要求

学习试管苗的移栽方法，提高试管苗的成活率。 二、实验内容

以药用植物的试管苗为实验对象，对试管苗进行冲洗，洗去根部的培养基，然后移栽到适宜的生长基质上，观察生长情况。

三、实验原理

当药用植物无菌苗长到高4~5cm时即可移栽入土，由于在室内人工光照下培养的试管苗十分幼嫩，因此要成功的大量移栽试管苗，必须掌握以下几个环节：1.选择健壮的幼苗，要求节间短而粗壮、叶片大而浓绿，展叶四片以上，没有水渍壮叶，具有三条以上的根，根尖为黄白色，不发黑。2.逐步增加光照强度和降底空气相对湿度，促使试管苗慢慢适应自然生长条件。3.选用合适的驯化基质。 …… 此处隐藏：886字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……