植物组织培养校本教材123 - 图文(10)

然后清洗部分较脏的玻璃器皿，方法：采用先碱后酸，即用洗衣粉洗刷后冲洗干净→晾干→侵入酪酸洗液，浸泡时间视器皿的肮脏程度而定→清水反复冲洗干净→蒸馏水淋洗一遍→烘干备用。

带有石蜡或胶布的器皿：先将其除去，再用常规洗涤，石蜡用水煮沸数次即可去掉，胶布粘着物则需用洗衣粉液煮沸数小时，再用水冲洗，凉干后浸入洗液，以后的步骤同前。

对器皿和用具进行高压灭菌， 使用高压灭菌锅，在121℃下保持15~20分钟。解剖刀、手术剪、解剖针、镊子等用具 在接种前还要用百分之七十的酒精棉球擦一下，再用酒精灯的火焰灭菌，冷却后即可应用。 六、考核原则

按学生分组情况，观察各分组的操作情况以及完成情况。

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实训二 母液的制备及培养基的配制、灭菌

一、 目的要求：

通过掌握培养基对母液制备及常用培养基的配制和灭菌方法，为植物组织培养准备合适的营养条件。 二、 实验内容

学习母液和培养基的配制，灭菌的方法。 三、 实验原理

植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的组成成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基，因此，在进行大量工作之前，对不同培养基应进行分析、比较、试验，选择一个符合试验材料需要的适宜培养基。

大多数植物组织培养所用的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。 四、 实验仪器与材料

高压灭菌锅、冰箱、普通及精密天平、电炉、玻璃器皿（烧杯、容量瓶、移液管、试剂瓶、三角瓶、漏斗），化学试剂(CaCl2〃2H2O，KNO3，MgSO4〃7H2O，

NH4NO3，KH2PO4，Na2—EDTA，FeSO4〃7H2O，MgSO4〃4H2O，Zn SO4〃7H2O，H3BO3，KI，NaMoO4〃2H2O，CuSO4〃5H2O，CoCl2〃6H2O，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，肌醇，蔗糖，琼脂，若干种生长调节物质及天然复合物，HCL,NaOH,酒精)，以及称量纸、药匙、玻璃棒、精密度纸，瓶盖用纸，线绳或橡皮筋、铅笔、标签纸。 五、 方法和步骤 1、母液的配制

母液的配制是按所使用药品的类别，而分别配成大量元素、微量元素、维生素和铁盐等。配制母液时特别要注意无机盐成分在一起，可能产生的化学反应，如Ca2+和SO2-4,Ca2+,Mg2+和PO3-4一起溶解后，会产生硫酸钙或磷酸钙的不溶物沉淀，因此不能配在一起作母液贮存，应分别配制和保存。

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配制母液时要用双重蒸馏水等纯度较高的水，药品应采用化学纯或分析纯级，药品的称量及定容都要准确，各种药品先以少量蒸馏水使其充分溶解，然后按培养基上的排列顺序混合。

现以MS培养基为例叙述如下：根据各种药品的特点，母液可配成4种。 母液Ⅰ：把大量元素按培养基配方的20倍浓度混合在一起。 KNO3 38克 NH4NO3 33克 MgSO4/7H2O 7.4克 KH2PO4 3.4克 CaCl2/2H2O 8.8克

加水定容至1000毫升，配1升培养基时，吸收50毫升，注意CaCl2应待其它度剂彻底溶解后再加入，否则易出现沉淀。

母液Ⅱ：把硼、锌、锰、铜、钴、钼等微量元素，接培养基配方浓度的1000倍浓缩配制在一起。

MnSO4*4H2O 22.3g ZnSO4*7H2O 8.6g H3BO3 6.2g KI 0.83g Na2MoO4*2H2O 0.25g CuSO4*5H2O 0.025g CoCL2*6H2O 0.025g 加水定容至1000毫升，配一升培养基时，吸取1ml. 母液Ⅲ：按培养基配方浓度的100倍液浓缩配制在一起。 甘氨酸 0.20g

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盐酸硫胺素 0.04g 盐酸吡哆素 0.05g 烟酸 0.05g 肌醇 10.0g

加水定容至1000毫升，配一升培养基时，吸取10ml.

为了配制不同培养基时使用方便，也可以将母液Ⅳ各维生素物质分别配制，一般配成浓度为：甘氨酸2mg/ml，盐酸硫胺素1mg/ml，盐酸吡哆素1mg/ml，烟酸1mg/ml，肌醇20mg/ml.

母液Ⅳ：

Na2-EDTA 3.73g FeSO4/7H2O 2.78g

加水定容至500ml，配一升培养基时，吸取10ml. 2．植物激素的配制：

一般将植物激素配制成0.1~0.5mg/ml的溶液，由于多数植物激素难溶于水，可采用以下方法配制：

6-BA、IAA、IBA:先溶于少量95%乙醇中，再加水定容。

NAA:可溶于热水中或用少量95%乙醇或少量1N的NOH溶解后，再加水定容。 2，4-D不溶于水，可用95%的乙醇溶解后，再加水定容。 …… 此处隐藏：123字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……