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图 2 重组表达质粒 pET28a-Sm29的双酶切鉴定 1: pET28a-Sm29双酶切产物，M:DL 2000 Marker

Fig.2 Identification of pET28a-Sm29 plasmid by restriction endonuclease analysis

Sm29 图3 Sm29 诱导表达及SDS-PAGE 分析

1:诱导前菌体，2:菌体诱导1h，3:菌体诱导3h，4:菌体诱导5h，M:低分子量蛋白Marker。

Fig.3 SDS-PAGE analysis of protein expression

3.3 Sm29融合蛋白的 Western-blotting鉴定

免疫印迹分析, 该蛋白能特异地被抗6×His-Tag(1∶100稀释)识别，于约21kDa 位置有一条条带。本室先前制备的抗日本血吸虫表膜rSj29单克隆抗体不能识别该蛋白。如图4所示。

图 4 rSm29蛋白的 Western blotting 分析

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1: pET28a-Sm29诱导前，抗6×His-Tag，2: pET28a-Sm29诱导5h抗6×His-Tag，3: pET28a-Sm29

诱导前，纯化抗rSj29小鼠单克隆抗体腹水，4: pET28a-Sm29诱导5h，纯化抗rSj29小鼠

单克隆抗体腹水

Fig.4 Western blotting analysis of rSm29 protein

4 讨论

4.1 曼氏血吸虫表膜rSm29 蛋白的表达及鉴定

血吸虫的表皮曾被认为是无活力，只是有保护作用的“角皮”。但深入的研究发现，它是覆盖整个虫体的“合胞体”结构[14,15]。表皮在与宿主相互作用的过程中参与营养吸收、免疫逃避及免疫调节、排泄代谢产物、调节渗透压、感觉和信号转导等生理过程。血吸虫表面膜蛋白(表膜)是血吸虫虫体与宿主免疫系统直接接触的界面，也是宿主免疫细胞和免疫分子与虫体相互作用的界面。因表膜蛋白更易接触机体的免疫系统，刺激机体产生相对应的抗体，大多研究都支持虫体的表膜蛋白较其他蛋白有较好的诊断价值，表膜抗原用于检测感染血清中的抗体是血吸虫免疫诊断的重要方法之一[14,16]。因此寻找具有诊断价值的膜蛋白是许多科学工作者的研究兴趣。

本研究参考文献[2,13]，初步了解到Sm29是一血吸虫膜蛋白，因此构建了曼氏血吸虫Sm29基因的原核表达重组质粒pET28a-Sm29。pET28a-Sm29转化的BL21/DE3菌经IPTG诱导表达与His-Tag融合的蛋白（约21kDa），Western-blotting结果显示抗6×His-Tag抗体能特异性识别该蛋白，进一步验证了rSm29蛋白的表达，与预期结果相符。

4.2 日本血吸虫膜蛋白 rSj29 抗体检测价值的评估

据报道日本血吸虫与曼氏血吸虫虫卵卵壳成分中氨基酸组成非常相似[17]，朱荫昌等[18]认为曼氏血吸虫与日本血吸虫虫卵抗原存在着共同抗原成分，他们的研究结果显示日本血吸虫的虫卵抗原用于检测曼氏血吸虫病同样具有很高的敏感性和特异性。

通过Blast基因序列对比，我们发现曼氏血吸虫Sm29基因与日本血吸虫Sj29

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基因具有基因序列具有69%的相似度，曼氏血吸虫表膜Sm29蛋白与日本血吸虫表膜Sj29蛋白氨基酸序列55%的同源性。我们由此推测抗rSj29单克隆抗体能够特异性识别rSm29蛋白。本研究使用实习单位病原生物学教研室所纯化的抗rSj29小鼠单克隆抗体腹水对表达的rSm29蛋白进行Western-blotting鉴定。实验结果显示，抗rSj29单克隆抗体不能够特异性识别rSm29蛋白，即该rSj29单克隆抗体不能用于诊断曼氏血吸虫病。

5 结论

本研究成功地构建了原核表达重组质粒pET28a-Sm29并进行了原核表达，Western-blotting结果显示该日本血吸虫表膜rSj29单克隆抗体对曼氏血吸虫病没有诊断价值。

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