多肽及蛋白质质谱分析新进展

这是今年做毕设时找的论文资料,有关于蛋白质质谱的.

第第

卷期

质

谱

学

报

多肤及蛋白质质谱分析新进展陈绍农专

中国科学院兰州化学物理研究所潘远江陈耀祖

兰州兰州,

应用有机化学国家重点实验室

兰州大学

摘〔要」肤和蛋白质的结构分析常用化学及生物化学降解法近年来运用质讲多法日益增多本文简要综述质谱新技术如快原子轰击电离争联质语,,,,

电喷雾

质错子应用于多肤和蛋白质分子童浏定及序列分析的新进展

.

关键词多肤

蛋白质

质谱.

多肤及蛋白质是生命科学中极为重要的研究对象关于它们的分析研究一直是化学,

家及生物化学家极为关注的问题序列分析以及立体化学分析析应用于此的新进展,. .

.

其研究主要包括分子量的测定氨基酸的鉴定氨基酸,

,

,

随着生命科学的进展仪器分析手段的更新尤其是近年来,,

质谱分析在这方面应用的崛起使这一领域的发展突飞猛进

,

, '〕

本文将扼要综述质谱分,

质谱分析用于生物活性分子的研究具有如下优点灵敏度极高能为亚微克级试样提供信息能最有效地与色谱联用适用于复杂体系中痕量物质的鉴定或结构测定,,.

由于质.

谱法所具有的这些特点使它成为解决生命科学中分析研究的强有力手段发展前景诱人早在后,

年

,

小组首先对衍生化的多肤进行了电子轰击质谱的研究〔,

,

'

〕,

此

余年内尽管质谱应用于多肤和蛋白质的分析研究时有报道年创立了快原子轰击和,

〔

,

'

〕,

但是这方面的工,

作真正取得实质性突破是在质潜质谱了相当大的成功.

,

,

和,

年

,

〕

等创立了电喷雾

之后随着这些技术手段的广泛应用多肤与蛋白质分析近年来取得

快原子轰击质谱快原子轰击是,

用于多肚和蛋白质分析

种软电离技术是将快速惰性原子如氢射击存在于底物液中样,,,

品使样品离子溅出进入质谱分析器这种软电离技术非常适于高极性热不稳定的化合

年,

月

日收

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这是今年做毕设时找的论文资料,有关于蛋白质质谱的.

质

谱

学

报.

年

物的分析因而,

曾广泛应用于多肚和蛋白质的分析研究中通常有较高丰度的.

肤的,,

离子有时也会出现,

十

或,

十

甚至更高的离子系列

在实验中液体基质底物的选择是一个较

为重要的问题甘,

油硫代甘油间硝基节醇以及溶解于甲醇中的三硫赤鲜醇,

和二硫苏糖醇

的混合物都是几类常用的底物这些底物的特点是蒸汽压低在高真空的离子源中能在几分钟甚至更长的时间内仍以液态形式存在在在这些基质中增加适量的三氟乙酸往往能使多肤,,,.

中多肤被检测的总灵敏度往往受,

到多肤在所用基质中的溶解程度以及基质的表面活性等因素的影响有关研究表明〔,

,

十

峰大大增强,

.

在早期的实验,

中由于受到磁质谱质量范围的限制测定高质量的多肤分子量时必须降低电压因而导

致分辨率降低随着仪器的不断改进现在已经可以将较高质量的离子峰与其同位素峰分,,

辨

.

在肤的

中出现的序列信息碎片主要是通过酞胺键断裂而形成的这种断裂,

,

常伴随着电荷保持在序列分析方面单凭,

一端基或.

一端基上

·

'幻

,

这些系列裂解对质谱的相对贡,

献是由复杂的气相离子化学所控制的列常不完全,,,

一般能给出欣的分子量然而在确定多肤,

数据还难以达到令人满意的结果这是因为所必需的碎片系

"〕

.

尽管有很多文献报道提出可以仅用,

数据就能解决肤的序列问.

题其实在几乎所有这样的实例中所研究的多肚都是已知的因而所需碎片的质量可以通过计算后从出现在与基质相关的化学噪音中找出来""

如果是一个未知的多肤只靠,.

数据有把握建立起的只可能是含有,

一

个氨基酸的寡肚的序列.

因此在确,

定多肤的结构时

,

数据必须结合其它的物理化学信息如,

降解分析结端基的碎片峰都将.

果

另外化学衍生物质谱分析可能有助于序列测定,,

例如比较一个乙酞化的多肤与未,

乙酞化的多肤的

数据在乙酞化多肤的裂解中来自一.〕

质量位移,

,

借此可以识别肤的氨端 '和谷酞氨酸〕

此外乙酞化还能用来区分具有相同分子量,

质量数的赖氨酸以确认'

,

因为谷酞胺酸含一个酞胺支链根据

这一原理曾借反应质谱法鉴定了多肤〕,

.

同样一个多肤的梭基数目可通过甲醋化而加,

这类酷化可借以区分梭端和氨端串联质谱

多肤的二硫键则可以用在碱三乙胺或.

中还原

使质谱图中质量位移

而加以归属

·

能提供多肤的较为详细的分子结构信息将肤的,,

.

在串联质谱中

,

一

选择地,,

离子输送到位于第二无场区的碰撞室内经惰性气体碰撞活化而裂解,

这样可以滤掉原样品中的杂质基质以及其它背景的信号从而得到简化的子离子质谱,

后者由检测记录得到所谓的碰撞裂解质谱氨基酸的肤键序列而当其分子量超过,

,

谱图中一般可获得肤中的,

的肤键则用一般,

测定其序

列就较困难了高达'

.

但是最近曾有人利用,

台

一

串联双聚焦质谱仪测到质量数一

的肤序列

,〔

.〕

一般认为双聚焦质谱仪都适用于串联质谱的一,

和

一

,

这是由于它们能对质,

量数达几千

的多肤母离子和子离子提供一致的分辩能力其次双聚焦质谱仪产生,

的是带有转化能高达

的离子这些离子允许高能量碰撞活化而通过高能量范

这是今年做毕设时找的论文资料,有关于蛋白质质谱的.

第

期

多肤及蛋白质质谱分析新进展〕.

围的碰撞所得到的肚的子离子谱具有较好的重复性,

串联质谱应用于肤及蛋白质的序列分析虽然发展很快但现在仍处在初级阶段到目,

,

前为止所报道的应用串联质谱测定多肤序列的大部分实例仍主要是复核已知序列的多肤一个完全未知的多肤的子离子质谱解析起来仍有相当大的困难研究的实例也为数不,.

多主要间题是很难确定产生一套完整而又有可预测性的序列离子的条件这方面尚待进,

.

一步研究

.

绘制肤图

由

确定肤的分子量并用串联质谱进行序列分析成为蛋白质测定中,

降解法的理想的补充手段这整个实践过程一般称之为绘制肤图先将蛋白质进行酶解将酶解产物经,,,

"

".

所谓的绘制肤图就是,.

分析得出各组分的分子量和序列根,

据酶解的选择性以及这些质谱数据与已知结构的肤对照从而确定整个蛋白质的结构在这一过程中酶解产物通常采取反相,.,

先行分离这样会使问题简化且所得,,

结果更加可靠蛋白质在酶解以前 …… 此处隐藏：2521字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……