宝生物工程(大连)有限公司 One Step PrimeScript® miRN(3)

2. 在特殊情况下，例如当miRNA分子中GC含量偏高时，可在miRNA序列3’端减少3~4个碱基，从而

降低引物的Tm值；相反，如果miRNA分子中GC含量偏低时，可在miRNA序列5’端添加几个GC

碱基，从而提高引物的Tm值。例如：

let-7a Sequence F Primer Sequence

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UGAGGUAGUAGGUUGUAUAGUU CGGTGAGGTAGTAGGTTGTATAGTT UAAUACGUCGUUGGUGUUUCCAU TAATACGTCGTTGGTGTTTCCAT

● 问 答

Q1. RNA添加量多少合适？

A1. 一般情况下，20 μl体系可添加10 pg~1 μg Total RNA，当miRNA表达丰度很低时，可适当增加Total

RNA添加量。本公司的实验表明，最高可添加5 μg Total RNA，这主要取决于待检测的miRNA的表达丰度，也可以选择直接添加分离好的small RNA片段进行实验。

Q2. 定量PCR试剂是否只能使用SYBR Premix Ex Taq II（TaKaRa Code：DRR081）？

A2. 本试剂盒的反应体系经过特别优化，配合SYBR Premix Ex Taq II（TaKaRa Code：DRR081）使用效果最佳，其它公司的相关定量试剂未进行评价实验，不能保证使用效果。

Q3. 使用SYBR Premix Ex Taq II时，是否需要对Mg2+浓度进行研讨？

A3. 使用SYBR Premix Ex Taq II时，不需要对Mg2+浓度进行研讨。实验时请首先使用本公司说明书推荐的

PCR反应条件，如果得不到良好实验结果时，再研讨PCR反应条件，改变使用的PCR引物等。

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MEMO

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宝生物工程（大连）有限公司

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