外生长的影响及相关实验技术的研究

湖南师范大学

硕士学位论文

四种人参三醇组皂苷对小鼠骨髓MSC体外生长的影响及相关实验

技术的研究

姓名：朱海林

申请学位级别：硕士

专业：动物学

指导教师：汪保和

20090501

摘要

研究背景及目的：人参皂苷对骨髓间充质干细胞的药理作用鲜见报道。已有研究表明，人参皂苷的脱糖基化可能与其药理活性密切相关。本部分工作旨在研究人参三醇组皂苷对体外培养条件下小鼠骨髓问充质干细胞（ＭＳＣ）增殖的影响，并分析脱糖基化与人参三醇组皂苷药理活性的关系，以期更进一步认识人参皂苷的药理作用机制。

方法：进行小鼠骨髓ＭＳＣ原代和传代培养，分组在ＭＳＣ培养体系中加入人参三醇组皂苷Ｒｅ、Ｒ９１、Ｒｈｌ、ｐｐｔ，测定ＭＳＣ集落形成率和细胞数，自行设计和制作了贴于培养板底部的胶片，此网格用于细胞计数区的定位，用目镜网格计数细胞。目镜网格单元方格的平均细胞计数除以方格的面积，再乘培养孔底面积，从而计算出一个孔的细胞总数。ＭＴＴ比色试验测定细胞活力，实时定量ＲＴ．ＰＣＲ检测Ｃ啪、缈砌Ｅ、以Ｊ珊ⅢＡ表达水平。

结果：体外培养体系中，人参皂苷Ｒｈｌ在１０肚ｍｏｌ／Ｌ～２０“ｍｏｌ／Ｌ的浓度范围内，ＭＳＣ集落产率显著减低；浓度为２０ｕｍ０１／Ｌ时，ＭＳＣ传代扩增细胞数明显减少；浓度在５肛ｍｏｌ／Ｌ～２０ｐｍ０１／Ｌ范围内，ＭＳＣ传代细胞的ＭＴＴ试验吸光值明显低于对照组。ｐｐｔ为２０ｐｍｏｌ／Ｌ时，ＭＳＣ集落产率显著减低，ＭＳＣ传代细胞的ＭＴＴ试验吸光值明显减小。然而，在人参皂苷Ｒｅ和Ｒｇｌ实验组与对照组之间，以上三种实验指标均无明显差异。在培养体系中人参皂苷Ｒｅ、Ｒｇｌ、Ｒｈｌ、ｐｐｔ

为１０“ｍｏｌ／Ｌ时，ＭＳＣ传代细胞的缈砌ＥｍＲＮＡ表达水平明显下降，而ＣＤ灼和叩ｎＴ】ＲＮＡ表达水平无明显变化。

结论：以上结果表明，在一定的浓度，人参三醇组皂苷Ｒｈｌ和ｐｐｔ能减低小鼠原代骨髓ＭＳＣ的集落生成能力，抑制ＭＳＣ传代细胞的增殖，而Ｒｅ、Ｒｇｌ对这些细胞的体外增殖无明显影响。这提示人参三醇组皂苷的药理活性可能有赖于其分子某种程度的脱糖基化。人参皂苷Ｉ沁、ｌ沁ｌ、Ｒｈｌ、ｐｐｔ对ＭＳＣ传代细胞的妒砌Ｅ的表达有下调作用，其意义还需进一步研究。

关键词：人参皂苷，间充质干细胞，体外增殖，网格，细胞计数

ＡＢＳＴＲＡＣＴ

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