T—SPOT.TB快速诊断肺外结核的探讨

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Guz o e ia u n[2 0 Vo. 3 No 1 ih uM dc l o r a,0 9, 1 3, . J

伤员的具体情况采取相应消毒隔离措施，严格执并

( 5): 0. 44

行探视制度。对多重耐药菌株的病人采取标准预防和接触隔离预防，采用特殊标志标识等。有了这并一

[]董晓勤，田美， 2周施新颜，非发酵菌感染的临床分布等.和耐药谱分析[]中华医院感染学杂志，0 4 1 ( ) J. 20,4 7:81 1.

系列的医院感染控制方案及措施，出现耐药菌未

株在院内的传播及医院感染的暴发。参考文献

[]陈东科， 3彭红，张秀珍.医院内不动杆菌产酶耐药表型

研究[ . J临床检验杂志，042()2.] 20,21: 8[]马越， 4李景云，少鸿 .金细菌耐药性监测分析中应注意的问题[]中国抗生素杂志， 0 5 3 ( 2: 6— J. 2 0, 0 1 ) 7 2769.

[]徐丽英， 1朱美珍，刘彩霞，重耐药鲍曼不动杆菌医院等.感染的暴发和控制D]浙江中西医结合杂志，0 7 1 . 2 0,7

TS O T—P T. B快速诊断肺外结核的探讨贵州省安顺市人民医院检验科(600 510) 金碧祥贵州省德江县民族中医院检验科(620贺天辉吴小敏 55O)中图分类号： 5 R2文献标识码： B文章编号：0 07 4 2 0 ) 10 6—2 10—4X(0 9 0—040

我国是世界上仅次于印度的第二大结核病大

结核性腹膜炎 2例，核性胸膜炎 9例，结肾结核 1 例。所有检测均于早晨取血 4mI。

国。近年来，结核病的发病率有上升趋势，临床上经常会遇到一些症状不典型的结核病和肺外结核病， 而目前可用于诊断结核病的方法有限，同时又缺乏快速敏感的实验室技术，为结核病的早期诊断与治疗带来困难。酶联免疫斑点 ( ny n e E zmel k di i mmu—n s o sa, I S OT) o p t sy E P a I技术是一种新型的免疫酶技术，单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞从因子细胞 _。由 E P 1] I S OT发展而来的 ( S OT. I T-P

12试剂和仪器 .

C 2 O细胞培养箱，结核杆菌感

染，_P T

. rS O TB试剂盒。

13外周血单个核细胞的分离和计数采集 4m . I外周血标本于 8m I柠檬酸钠抗凝的真空采血管 VauanrC T( D),标本注入管子后，即 c tie P B内血立轻轻颠倒 5次，分混匀血和抗凝剂。按试剂盒操充

TB结核感染 T细胞斑点试验技术用于检测结核 )感染后特异性 T细胞分泌的 7干扰素 (F 7, IN )并

作，制备细胞沉淀悬液。在 1 5m . I离心管中加入 1 I已制备样品细胞悬液和 4 I的 0 4台酚 0 0 .兰 (rp nbu )制备 1: ty a le, 5细胞稀释液。取 1 1 0 台酚兰/细胞混合悬液加入血细胞计数板并进行活细胞计数计算每毫升细胞数量。手工使用血细胞计数板，数 4计×4大格含 0 1 I样品。每毫升细胞 . 数量一细胞计数×稀释倍数 x14算细胞稀释需 计 0

据此结果判断是否感染结核。本文就我院就诊的肺外结核病患者用 r S OT. r P _ TB方法测试，讨其对探

肺外结核快速诊断的应用价值。1材料和方法

要的体积并加入相应的 AI M—V无血清培养液制备成终浓度为 2 0 0/0 I的稀释细胞工作液。 5 0 10F 0 14检测分别加入 5 I培养基， . O 阳性质控物， 结核分枝杆菌特异抗原 A和 B于相对应阴性对照和阳性对照孔，和 B检测孔。对于每个标本， A加

1 1对象 .

收集 20年 9 06月至 20 07年 6月德江

县民族中医院 2 0名健康体检者，年龄 2~4 0 0岁。2 0例非结核疾病患者，中，例类风湿性关节炎，其 5 2

例肺癌，例肺气肿，例糖尿病，例子宫肌瘤，例 3 3 3 2经临床确诊，并排除结核感染。肺外结核患者 2 7例，年龄 3 2,~7岁所有患者经病理检测或穿刺物抗

风心病，例关节脓肿。以上病例均结合相关辅查，入 10 2 0 I浓度为 2 00 0 10 5 0/0 I的稀释细胞工作液。3 7℃ 5 C 2育 1~ 2 r。P S洗板 4 O孵 6 0hs B 次。加入 5 IB I/ B 0F CP N T底物溶液至所有孔中。 室温孵育 7mi。用去离子水充分洗涤孔的内部终 n止反应， 3在 7℃ 2 ~3h或室温过夜干燥培养板。

’ 使用显微镜计数每个孔中的有色斑点。

酸染色确诊。其中淋巴结结核 1例， 1骨结核 4,例注：本项目为贵阳市 2 0年科技计划( 06筑科农[0 61 3 2 0 - 8号第文件第 1 )贵阳市 2 0项， 0 7年创新创业资助项目( 1号)第

贵州医药 2 0年 1 09月第 3卷第 1 3期

6 5

1 5结果判断 .

阴性对照孔斑点数为 0,~5阳性样

本组资料中结核分枝杆菌特异性 T细胞阳性

本应为：抗原 A或抗原 B斑点数 ) (一阴性对照孔斑点数)点；阴性对照孔斑点数≥ 6点，≥6弹阳性样本

应为：抗原 A或抗原 B斑点数) 2阴性对照孔 (≥×(斑点数)。如果阳性对照孔结果良好，但抗原 A或抗原 B均达不到阳性样本判断标准，结果为阴性。则 l6统计学分析 检验结果均用阳性表示，用卡采

率在正常健康对照组和非结核疾病组间的差异有显著意义 ( P>0 0 )肺外结核组与两对照组比较， .5,差异均有显著差异 (< 0O )T S OT TB检测结核 P .5,—P .特异 T细胞方法的敏感性为 6.特异性 8。 67 4 另有资料表明 T S O TB在普通人群中的敏 -P T.感性为 9,健康人群中的特异性为 10, 6在 0在 HI f V I性患者中的特异性为 9[。目前该技术 5{ 2。]已在国外广泛用于活动性结核病和结核潜伏感染者

方检验方法，应用 S S 00 P S1.软件进行分析。2结果

的诊断及 H1 V合并结核感染的检测，于区别结核用感染与 B G接种以及耐药结核杆菌感染的快速检 C验。

结核分枝杆菌抗原特异 T细胞反应频率比较见表 1。结核分枝杆菌特异性 T细胞阳性率在正常

健康对照组和非结核疾病组间的差异有显著意义 (>O 0)而结核病组均高于前两组 (<O0 ) P .5, P .5, 2例结核病患者中结核抗原特异细胞阳性率 7 6 ., 67另两组分别为 1和 0。而非结核病组 O和肺外结核组 P D阳性率比较差异无显著意义 ( P P> O0 )说明 P D在肺外结核诊断中价值不大。 .5, P表 1结核分枝杆菌抗原特异 T细胞反应频率比较 (, )

目前，临床诊断结核的方法有限，核

菌素试验结 ( T)临床常用筛查结核的免疫学方法，然操 TS是虽作简单，观察结果方便，由于其有较高的假阳性和但假阴性，临床结核病的诊断意义不大。细菌学是对诊断结核的金标准，常规培养需要 2个月的时间，但 快速培养也需要 1周，且阳性率取决于采集标本而中细菌的数量，利于早期诊断与治疗。影像学作不

为辅助诊断方法，对肺外结核诊断存在困难， - T S O TB法作为一种新的酶免疫检测方法，敏 P T.它感性高，特异性强，操作简单，时少 (般 2d就能需一看到结果)。

综上所述，—P . T S OT TB技术作为一种检测结3讨论

核感染的酶免疫学方法，所需时间少，有利于疾病的

T S CT. B技术是利用结核杆菌感染者外周 -P I T

早期诊断与治疗，意义重大，对隐性结核有诊断价值。但由于价格昂贵，操作较繁琐，限制了该方法在临床的推广与应用。虽然本组试验样本量少，比对比较单一，但可以认为，在临床症状不典型、断不诊明确、片及培养均为阴性的疑似结核病患者中，涂辅

血单核细胞( B ) P MC中存在结核特异性 T细胞，这些淋巴细胞在受到结核杆菌特异抗原刺激后分泌 I N而设计的 T细胞免疫斑点试验。P MC、 F . B结核特异的混合抗原 A和混合抗原 B分别为 E A . ( S T 6 CPi和 F .0的部分多肽片段)与对照试剂一起加，入预先包被抗抗体的微孔培养板进行培养。当 P - B MC中存在特异性 T …… 此处隐藏：2604字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……