新疆地方绵羊遗传多样性AFLP检测方法的建立

研究以新疆地方绵羊为试验材料,为建立适合绵羊AFLP多态性分析体系,对其分析过程中DNA提取、酶切连接扩增、电泳及银染效果等相关环节进行了一定改进和检测。本试验通过筛选出的8对引物组合分析了新疆6个地方绵羊的遗传多样性。结果表明经优化后的AFLP体系条带清晰可辨。扩增信号较强.带型稳定,AFLP适合绵羊遗传多样性分析。

3 遗传育种 6.

LV ST C N o L R N U T IE O KA D P U T YtD s RYN 0 o2 4

新疆地方绵羊遗传多样性 AF P L检测方法的建立肖非 付永冷青文沈文王金富820 3 0 0) (疆石河子大学动物科技学院，新新疆石河子

表 1各品种绵羊材料来源及采集数量品种名称采集地点

中图分类号：8 7 ￥ 3. 2摘要

文献标识码： A

文章编号： 0 8 0 1 (0 90— 0 6 0 1 0— 4 42 0 ) 0 3— 3 4版 )1方法提取。并对其中相关的 1 2相关步骤做了改进：室温水浴中解冻血样

研究以新疆地方绵羊为试验材料，为建立适合绵羊A L F P多态性分

析体系，其分析过程中D A取、对 N提酶切连接扩增、泳及银染效果等相关环节进电行了一定改进和检测本试验通过筛选出的8引物组合分析了新疆 6对个地方绵羊的遗传多样性。结果表明经优化后的AF P系条带清晰可辨。增信号较强 .型 L体扩带稳定， L适合绵羊遗传多样性分析。 AF P

3m并转移至离心管，入 3m磷酸 L加 L盐缓冲液。室温3 5 0 g于 0 离心 1 i, 5 m n重复进行 2 3,至上清液颜色比较~次直

关键词

A I遗传多样性 F| P

检测方法

地方绵羊品种

澄清。吸取含有裂解红细胞的上清。将

沉淀重悬于22 裂解缓冲液并于 . mL 5The M e ho o t d fAFLP e or Ge e i v r iy S tup f n tc Di e st

3 7℃温育 1。裂解液转移至离心管 将 h中，裂解液不能超过 13积。加入蛋/体白酶 K ( 0 n/ L至终浓度 1 0 g 2 q m ) I g 0, mL将细胞裂解液置于5 水浴巾过。 0o C夜，溶液冷却至室温，入等体积的将加用 0 1 o L r— I H .平衡过的苯 . l T i C ( 80 m/ s p 1

Deet nwi o a h e f ija g t i t L c l e po nin co h S XX A e,u o g L N n— e, H N We W A G J—l I O Fi Y n, E Gj g w n S E i F i, N i f

n】(o ee f C l g o Anm l S ine eh ooy hhz U i ri, iei ij n, l i a cec&T cn l, iei nv st S hz, ni g gS e yh X a 8 20, hn) 3 00 C ia Ab ta t I hss d,h i t il f he m X￣in,nod rost sr c: nti t y eta mae a o epf i a g i re e u T rl r s o r tu ui b e AF o y r h s a a y i y t m o he p, hi p o e sAn y i p s t l LP p l mo p im n l s s s se f r s e i t s r g s, a ss o a n l f DNA x r c in d g s in c n e t n a lf a in e e t p o e i a d iv r e t to, i e to, o n c a d mp i c to, l c r h r ss n s le a i o sa n n . n e a e fe t r e e td i r g s . n t i e t ee td e g tp i t i i g a d r l t d ef c s we e d tc e n p o e s I h s t s,S l ce i h a r s

酚，慢颠转 1~ 5mi温和地混合两缓 0 1 n相。室温 50 0g心 1 n分离两 0离 5 mi以

相。用宽口移液管 (口直径 03c 出 . m)将粘滞的水相转移至另一离心管。用

o r e o iain n nlzdgnt i r t sxlcl h e f ij n . h fpi rcmbn t sadaaye eei dv s y i a sepo ni g T e m o c e i o X ar s lso p i z d s se s o t a h e u t o tmi e y tm h w h tt e AFL a d l a l ic r i l,h mp i e f P b n sc e ry d s e n b et e a lf d isg a to g r i n lsr n e,mo e s a l a d . r tb e b n s

苯酚再抽提 2 3,收集水相，将水~次相转移至另一离心管中。加入 O2 .倍体积 1 l醋酸铵及 2体积乙醇 . 0 mo L/倍 旋转离心管直至溶液彻底混匀为止。 D A即形成沉淀。用宽口移液管将 N随

K e wo

r s:AFL;g n tcdv ri; ee t n meh d;o a h e re s y d P e ei ie t d tci to s lc lse pb e d s y o

近几年来， F P (增酶切片段 A L扩长度多态性 )分子标记在动物上的应用越来越广泛。 F P由荷兰科学家 A L足由Z b u a e和Vo在植物研究中发展起来 s

对新蠼的畜牧业生产、发展和人们生活需求提供 l根本保证。然而受外来『品种因素的影响 .新疆地方部分绵羊品种也正在逐年减少。研究以6新本种疆地方绵羊品种为试材，立 AF P分建 L

DNA沉淀从乙醇溶液中移出，污染的

寡核苷酸仍留在其中。用 7%乙醇洗 0涤 D A沉淀 2 .待乙醇挥发殆尽加 N次入 1mL E静止直至 DNA完全溶解。将 T

的，是 R L和 P R相结合的产物， FP C其基本原理是对基因组酶切片段进行选择性扩增 I具有所需 DN I。 A量少，验实

D A液储存于4℃。待检测。 N溶 1 .酶切、接： D A样品稀释 .2 2连将 N到5 gI总体积2 L, L包括： 0r/ L, i x 0其 f| 模板 DNA4 IL,头 l L, c RIMs I x接 E o/ e

析体系，在优化该技术及推广运用的基础上，更好的分析了地方绵羊这一重要的经济物种的性状 .为更好利用

结果稳定可靠。复性强，典型的孟重呈

德尔遗传等特点。 F P动物种质鉴 A L在定、传图谱构建、的基因定位、遗目遗传多态性检测、体遗传结构、子标群分记辅助育种等方丽均有应用，新疆地方绵羊品种资源丰富，这些品种资源

和保护这些品种提供素材。1材料与方法 11材料 .

混合酶系 2 L 1 b f r. L ,0x u e25 ,AT 25 L, 4连接酶 l L, L P. T AF P—

w t 7 L混合离心数秒，水浴锅 a r。 e在上设置3 7℃保温过夜 . 8℃保温 4h 。 123预扩增及选择性扩增：检测结 ..将果中出现弥散型条带的酶切 D A行 N进预扩增，体积 2 L酶切产物 D A 总 5: N 2x Pr -a IL, e

mpmi IL, NTPs 5 IL,Ox x1L d 0. X l b fel 25 IL, qDNA poy u‘ . x Ta lmas 0. e 5

实验所用绵羊品种均来自新疆自 治区各县市，采用颈静脉采取血样5 ~

收稿日期： 0 9 0一l 20—3 1 基金项目：团基础研究项目( 0 7 C 2;兵 20J0 )

l,体见表 l 0 mL具。所用 AF P剂盒 L试购白北京^圈牛物技术公司。12 .方法

石河子太学动植物育种专项 (j20一 xs0 7v 0资助 z 2)

作者简介：肖非 ( 9 l )男，徽安庆人， 18一，安 在读硕士 .究方向：物遗传育种与繁殖研动通讯作者：金富，事遗传育种研究王从

1 . D A提取：采用苯酚一仿 _1 2 N的氯法，按照《子觅隆实验指南》第 i分 (

IL, L— tr 85 i x AF P Wae l . L离心数秒， L, 预变性：4℃ 2 ri 9℃3 5℃ 9 n.4 a 0 S.6