实验二 细菌的染色和细菌细胞构造的观察

实 验

二

细菌的染色和细菌细胞 构造的观察

细菌的染色和细菌细胞构 造的观察 目的要求 染色剂和染色的原理 实验材料 实验程序 思考题

目的要求 学习微生物涂片 掌握细菌的一般染色发和革兰氏染色 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 观察和识别细菌细胞的特殊构造

染色剂和染色原理Ⅰ 染色剂和染色原理Ⅰ 微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。 微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。 物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、 物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作 用等。 用等。 化学因素如： 化学因素如：正负离子之间的相互吸引等 染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、 紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性(复合)染料：如伊红、美兰等，Wright染料和 中性(复合)染料：如伊红、美兰等， 染料和Gimsa染 染料和 染 料等(常用于细胞核染色)。 料等(常用于细胞核染色)。 4. 单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物， 单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物， 不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类( 的染料。 不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类(Sudan b)的染料。 的染料

染色剂和染色原理Ⅱ 染色剂和染色原理Ⅱ微生物染色常用染料如下表： 微生物染色常用染料如下表：

实验材料 涂片染色用的细菌培养物大肠杆菌( 的斜面培养物。 1.大肠杆菌(Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 大肠杆菌 的斜面培养物 枯草杆菌( 的斜面培养物。 2.枯草杆菌(Bacillus subtilis) 12—16h的斜面培养物。 枯草杆菌 的斜面培养物

载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、 载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴、 无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。 无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。 示范片苏云金芽孢杆菌( 1.苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的芽孢； 苏云金芽孢杆菌 )的

芽孢； 胶质芽孢杆菌( 2.胶质芽孢杆菌(Bacillus mucillaginosus)的荚膜； 胶质芽孢杆菌 )的荚膜； 枯草芽孢杆菌的鞭毛。 3.枯草芽孢杆菌的鞭毛。 枯草芽孢杆菌的鞭毛

实验程序Ⅰ 实验程序Ⅰ(细菌染色的方法和步骤) 细菌染色的方法和步骤)

细菌染色的方法 细菌染色的方法: 1.单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察 单染色法：用一种染色液染菌体后， 微生物的大小、形状、和细胞排列状况， 微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴 别微生物以及它的特殊构造等。 别微生物以及它的特殊构造等。 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色， 2.复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色， 有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。 有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常 用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、 芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。 芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。 染色技术的一般过程片 干燥 固定 染色 干燥 水洗 镜检 媒染 脱色 复染 涂

实验程序Ⅱ 实验程序Ⅱ(简单染色的方法和步骤) 简单染色的方法和步骤) 简单染色法(一般染色法) 简单染色法(一般染色法) 菌种： 1.菌种：牙垢细菌 菌种 2.涂片 涂片 干燥： 3.干燥：自然气干或酒精灯 干燥 高处微微加热。 高处微微加热。 4 固定 染色： 5.染色：在整个涂面上滴加 染色 齐氏石炭酸复红，染色1 齐氏石炭酸复红，染色1分 钟。 水洗： 6.水洗：倾去染液，用自来 水洗 倾去染液， 水细流冲洗至流下的水中无 染料颜色为止。 染料颜色为止。 7干燥：空气中自然干燥。 干燥：空气中自然干燥。 镜检： 8 镜检：在油镜下观察牙垢 中的各种细菌形态并绘图。 中的各种细菌形态并绘图。

实验程序Ⅲ 实验程序Ⅲ(革兰氏染色的方法和步骤) 革兰氏染色的方法和步骤) 革兰氏(Gram)染色法 革兰氏( ) 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加 初染： 草酸铵结晶紫染液， 分钟， 草酸铵结晶紫染液，染1分钟， 分钟 倾去染液，流水冲洗至无紫色。 倾去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘 媒染： 液冲去残水， 液冲去残水，而后用其覆盖涂 分钟， 面1分钟，后水洗。 分钟 后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加 脱色：除去残水后， 95%酒精进行脱色约 秒，后 酒精进行脱色约30秒 酒精进行脱色约 立即用流水冲洗。 立即用流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1 复染：滴加番红染色液， 分

钟，水洗后用吸水纸吸干。 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 镜检：观察染色结果并绘图。

实验程序Ⅳ 实验程序Ⅳ(荚膜染色的方法和步骤) 荚膜染色的方法和步骤)

荚膜染色法(示范):荚膜薄，易变形， 荚膜染色法(示范):荚膜薄，易变形， ):荚膜薄 因此在涂片过程中不能用加热固定。 因此在涂片过程中不能用加热固定。 1. 取斜面培养 取斜面培养72h左右的胶质芽孢杆菌涂 左右的胶质芽孢杆菌涂 自然干燥，自然固定。 片，自然干燥，自然固定。 2. 染色：在已自然晾干的涂面上，滴加 染色：在已自然晾干的涂面上， 1%结晶紫染色液染色 结晶紫染色液染色2min,以20%硫酸 结晶紫染色液染色 ， 硫酸 铜冲洗数次，再用自来水冲洗1次 晾干。 铜冲洗数次，再用自来水冲洗 次，晾干。 3. 镜检：油镜观察示范片并绘图(菌体 镜检：油镜观察示范片并绘图( 红色，荚膜无色)。 红色，荚膜无色)。

实验程序Ⅴ 实验程序Ⅴ(鞭毛染色的方法和步骤) 鞭毛染色的方法和步骤) 菌液的制备及涂片：菌种应预先连续传代 菌液的制备及涂片：菌种应预先连续传代5—6代。 代 1. 接种：先在斜面底部加入 接种：先在斜面底部加入0.5—1mL无菌水，取活化的枯草 无菌水， 无菌水 杆菌1—2环菌苔，接种于无菌水中，300C 培养 环菌苔， 培养15—18h。 杆菌 环菌苔 接种于无菌水中， 。 2. 制备菌液：挑取斜面底部近水面处菌苔数环，移入 制备菌液：挑取斜面底部近水面处菌苔数环，移入1mL与 与 菌种同温的无菌水中， 温箱中保温10min。 菌种同温的无菌水中，在280C温箱中保温 温箱中保温 。 3. 鞭毛涂片：先用悬滴法观察其运动性，若运动性很强，即 鞭毛涂片：先用悬滴法观察其运动性，若运动性很强， 可涂片。涂片后自然干燥、固定。 可涂片。涂片后自然干燥、固定。

染色：染色液必须新配制，涂片必须充分晾干才能染色。 染色：染色液必须新配制，涂片必须充分晾干才能染色。

1. 先用刚过滤的鞭毛染色液 染7.5—8min左右。 先用刚过滤的鞭毛染色液A染 左右。 左右 2. 倾去 液，再加鞭毛染色液 液染 倾去A液 再加鞭毛染色液B液染 液染3—5min,水洗，自然干 ，水洗， 燥。 3.用C液石炭酸复红复染2min,水洗、晾干、镜检。 用 液石炭酸复红复染2 ,水洗、晾干、镜检。 油镜下观察鞭毛的数目及着生情况(示范镜) …… 此处隐藏：1739字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……