细胞生物学实验教案(1) - 图文(5)

5. 气孔有时呈纺锤形、圆形（开放时），有时呈条形（闭合时）。 【实验报告及作业】

1. 画出分离后的细胞组分（注明形态的放大倍数）。 2. 分离细胞组分时，为什么要加入0.35mol/L 氯化钠？

实验四 细胞膜的通透性 实验五 植物凝集素对RBC的凝集作用

【实验安排】

1、实验原理讲解；（30分钟） 2、细胞凝集反应；（40分钟） 3、细胞膜的渗透性。（50分钟）

4、实验小结 ：总结实验过程中学生的操作是否规范；实验是否成功，如果不成功，问题出在哪里；哪些实验作得比较好。提醒预习下节课实验内容，提问。 （15分钟）

【实验目的】

1、 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 2、 掌握细胞凝聚的原理； 3、 熟悉凝集素；

4、 了解凝集素对细胞凝集的特异性。 【实验原理】 1、细胞膜的渗透性

渗透：在半透膜隔开的两种不同浓度的溶液之间，水分子通过半透膜由低浓度一侧流向高浓度一侧的现象。 扩散：在半透膜隔开的两种不同浓度的溶液之间，溶质分子通过半透膜从高浓度一侧向低浓度一侧移动的现

象。

等渗溶液：渗透压相等的溶液。

渗透压：在渗透作用进行时，溶液中溶质所具有的吸引和保留水分子的力量称为渗透压。

当红细胞置于不同种等渗溶液中时，由于对各种溶质的通透性不同，有的溶质可透入，有的不能渗入。渗入红细胞的溶质就可提高红细胞的渗透压，使细胞外水分进入红细胞，引起细胞膨胀破裂，导致溶血。由于溶质透入速度不同，溶血时间也不同。 2、细胞凝集反应：

细胞外被：细胞膜外表面的一层粘多糖物质。参与细胞粘着、细胞识别、细胞生长分化、免疫反应等；

凝集素：一类含糖的，并能与糖专一结合的蛋白质，具有凝集细胞，刺激细胞分裂的作用。

凝集素的特点：一种凝集素具有只对某一种特异性糖基专一性结合的能力；另一方面，凝集素具有多价结合能力。

凝集原理：与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成 “桥”的结果。加入与凝集素互补的糖分子可以抑制细胞间的凝集反应。

凝集素是一类从各种植物种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖的蛋白。因其能凝集红细胞，故名凝集素，亦称外源凝集素。除红细胞外，还能凝集淋巴细胞、纤维细胞、精子等。常用的为植物凝集素。通常以其提取的植物命名，如刀豆素A（ConA）、麦胚凝集素(WGA)、植物血激素(PHA)、花生凝集素(PNA)等，凝集素(Ietin)是其总称。日前已纯化并鉴定的植物凝集素有近100种。凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞膜表面的糖基。一种凝集素具有只对某一种特异性糖基专一性结合的能力．如刀豆素A与吡喃糖基甘露糖结合，麦芽素与N—乙酰糖胺（N—acetyl glucosamine）结合；菜豆凝集素与N—乙酰乳糖胺结合。因此，凝集素可以作为研究细胞膜结构的探针。另一方面，凝集素具有多价结合能力，能与荧光素、酶、生物素、铁蛋白及胶体金等结合、而不影响其生物活性，从而在光镜与/或电镜水平显示其结合部位。在探索细胞分化、增生和恶变的生物学演变过程，显示肿瘤相关抗原物质，以及对肿瘤的诊断评价等方面均有一定的价值。 【实验用品】

（一）、材料：人血细胞、土豆。

（二）、器材： 离心机、载玻片、天平、滴管、刀片、小烧杯，试管、试管架，移液管、吸耳球、秒表。 （三）、试剂： 1. 蒸馏水。

2. 0.17mol/L NaCl 溶液。 3． 0.17 mol/L NH4Cl 4． 0.17 mol/L NaNO3溶液。 5. 0.12 mol/L Na2SO4 溶液。 6. 0.32 mol/L 葡萄糖。 7. 0.32 mol/L 甘油。

8. 0.32 mol/L 乙醇。 9.

0.32 mol/L 丙酮。

10. 生理盐水 11. PBS缓冲液 【实验步骤】 一、细胞膜的通透性

1、血细胞悬液的制备： 血液：生理盐水 = 1：10 2、低渗溶血观察： 3ml蒸馏水+ 0.3ml RBC悬液，混匀。 溶血现象的观察：透明度、离心

3、RBC对物质的渗透性观察： 3ml溶液+ 0.3ml RBC悬液 试管编号

1、0.17mol/LNaCI+RBC 2、0.17 mol/L NH4Cl+RBC 3、0.17 mol/L NaNO3+RBC 4、0.12 mol/L Na2SO4 +RBC 5、0.32 mol/L 葡萄糖+RBC 6、0.32 mol/L 甘油+RBC 7、0.32 mol/L乙醇+RBC 二、细胞凝集反应

1、提取植物凝集素：土豆去皮，称取20g ，切成薄片，加入100mlPBS缓冲液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶

性土豆凝集素） 2、制备2%的RBC悬液：

（1）、洗涤血细胞：2ml抗凝全血中加入8ml NS，2000r/min离心5min,弃去上清，再加入生理盐水，反复洗涤5

次；

（2）、制备2%的血细胞悬液：经过洗涤的RBC，按压积用生理盐水配成2%的RBC悬液。

（3）、细胞凝集观察：载玻片上滴一滴土豆凝集素 ，再滴一滴2％红细胞悬液 ，充分混匀，静置20 min，观察血

球凝集现象。

PBS缓冲液加2％血细胞悬液作为对照实验 【作业】

1、 分析比较细胞膜通透性实验中所观察到的结果 2、 推断下列溶液的溶血反应：

0.17mol/L KCI 、0.17mol/L KNO3、0.12mol/L MgCI2、0.12mol/L(NH4)2SO4、0.32mol/L甘露醇、0.32mol/L蔗糖

是否溶血

溶血时间

结果分析

3、绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。

表6—1 常见的凝集素一览表

凝 集 素 花生（ Peanut agglutinin） 刀豆（Concanavalin ensifomis agglutinin） 蓖麻（Ricinus communis agglutinin） 扁豆（Lens cuinaris agglutinin0 豌豆（Pisum satiwum agglutinin） 菜豆（Phaseolus vulgaris agglutinin） 大豆（soybean agglutinin） 荆豆（Ulex europeaus agglutinin） 麦胚(Wheat germ agglutinin) (Bandeiraea simplicifolia agglutinin) 双花扁豆（Dolichos bifows agglutinin） 槐（Sophora japonica agglutinin） 缩 定 PNA ConA RCA LCA PSA PHA SBA UEA WGA BSA DBA SJA 特异性结合 D—半乳糖、Gal(1→3)—GalNAC D-葡萄糖、D-甘露糖 D—半乳糖、D-GalNAC>半乳糖 D-甘露糖、D—葡萄糖 D-甘露糖 D-GalNAC D-GalNAC>>D-半乳糖 L-岩藻糖 D-GalNAC、NANA D-半乳糖 D-GalNAC D-半乳糖、D-GalNAC 实验六 DNA的Feulgen染色

【实验安排】

1、讲解实验原理、操作过程、注意事项。 2、分组实验：6人一组 【实验目的】

1、 掌握Feulgen反应显示DNA的组织化学过程 2、 掌握Feulgen方法的基本原理 3、 了解DNA的分布部位 【实验原理】

利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊基团特异性结合的特征，通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来判断某种物质在细胞中的分布和含量。

标本经1N HCl 、60℃水解，可将DNA分子中嘌呤碱基与脱氧核糖之间的糖苷键打断，使嘌呤脱下，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色，从而显示出DNA的分布。细胞中只有DNA才具有这种专一的孚尔根反应。

2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3

Schiff试剂的基本成分是碱性品红，偏亚硫酸氢钠(NaHSO3)和盐酸。

碱性品红的主要成分是三氨基三苯甲烷氯化物。碱性品红原为桃红色，当与亚硫酸作用时还原，使醌型变为苯型，由桃红色变为无色透明的N-亚磺酸亚硫酸副品红碱，当它与醛基作用时，其分子式又恢复为醌型结构， …… 此处隐藏：2138字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……