从番茄中提取番茄红素和B-胡萝卜素

从番茄中提取番茄红素和B-胡萝卜素

一、实验目的

1、掌握从番茄中提取分离胡萝卜素和番茄红素的原理和方法。

2、学会用分光光度计法测定胡萝卜素和番茄红素的方法。

二、实验原理

番茄中含有番茄红素和少量的β-胡萝卜素，二者均属于类胡萝卜素。类胡萝卜素为多烯类色素，不溶于水而溶于脂溶性有机溶剂。本实验先用乙醇将番茄中的水脱去，再用二氯甲烷萃取类胡萝卜素。因为二氯甲烷不与水混溶，故只有除去水分后才能有效地从组织中萃取出类胡萝卜素。根据番茄红素与B-胡萝卜素极性的差别，用柱色谱可以将它们分离。分离效果可以用薄层层析进行检验。最后用分光光度法进行测定。

二、实验材料和试剂

1、材料：

新鲜番茄

2、试剂

95%乙醇；二氯甲烷；石油醚（60～90℃）；氯仿；中性或酸性氧化铝（柱层析用）；环乙烷；硅胶G；饱和氯化钠溶液；无水硫酸钠。

三、实验步骤

1、原料处理与色素提取

称取新鲜番茄20g于研钵中磨碎，置于100ml圆底烧瓶中，加95%乙醇40ml，摇匀，装上回流冷凝管，回流5min，趁热抽滤，只将溶液倒出，残渣留在瓶内，加入30ml二氯甲烷到瓶中，加热回流5min，将上层溶液倾出抽滤，固体仍保留在烧瓶内，再加10ml二氯甲烷重复回流萃取一次。合并乙醇和两次二氯甲烷提取液，倒入分液漏斗中，加5ml饱和氯化钠溶液（有利分层），振摇，静置分层。分出橙黄色有机相，使其流经一个在颈部塞有疏松棉花且在棉花上铺一层1cm厚的无水硫酸钠的三角漏斗，以除去微量水分。将此溶液储存于干燥的有塞子的锥形瓶中。层析之前，将此溶液在通风橱中用热水浴蒸发至干。

2、柱层析分离

取一支长15cm左右内径为1～1.2cm的色谱柱，柱内装有用石油醚调制的氧化铝。将粗制的类胡萝卜素溶解于4ml苯中，用滴管在氧化铝表面附近沿柱壁缓缓加入柱中（留1～2滴供以后的薄层层析用），打开活塞，至有色物料在拄顶刚流干时即关闭活塞。用滴管取几毫升石油醚，沿柱壁洗下色素，并通过放出溶剂至柱顶刚流干，从而使色素吸附在柱上。然后加大量的石油醚洗脱。黄色的B-胡萝卜素在柱中移动较快，红色的番茄红素移动较慢。收集洗脱液至黄色的B-胡萝卜素从柱上完全除去，然后用极性较大的氯仿作洗脱剂洗脱番茄红素（注意更换接收瓶）。将收集到的两个部分在通风橱内用热水浴蒸发至干。将样品分别溶于尽可能少的二氯甲烷中，尽快进行薄层层析。

3、薄层层析检验

在用硅胶G铺成的硅胶薄层板上距离底边约1cm处，分别用毛细管点上三个样品，中间点为未分离的混合物，两边分别点上分离得到的β-胡萝卜素和番茄红素。可以多次点样，即点完一次，待溶剂挥发后再在原来的位置上点样。但要注意，必须在同一位置上点，而且样品斑点尽量小。点样时毛细管只要轻轻接触板面即可，切不可划破硅胶层。样品之间的距离为1～1.5cm。将此板放入装有环已烷作展开剂

的层析缸中，盖上盖子。切勿让展开剂浸没样品斑点。待溶剂展开至10cm左右时，取出层析板。因斑点会氧化而迅速消失，故要用铅笔立即圈出。计算不同样品的R1值，比较不同样品R1值大小的原因以及分离效果。

4、分光光度法测定

在分离好的胡萝卜素和番茄红素中加入等量的石油醚进行稀释，将稀释的溶液在420nm到520nm波长之间进行测定吸光度A，每隔10nm测定一次。做出A-λ曲线。指出各自的最大吸收峰，并与标准吸收对照鉴定。