血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定

来源：网络收集时间：2026-05-27

导读：血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定血清白蛋白、血清白蛋白、γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定的分离、血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定分离纯化的一般程序选择材料破碎细胞提取分离纯化(预处理) 预处理) (粗分级，细分级) 粗分级，细分级) 分析及鉴定血清

血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定

血清白蛋白、血清白蛋白、γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定的分离、

血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定

分离纯化的一般程序选择材料破碎细胞提取分离纯化(预处理) 预处理)

(粗分级，细分级) 粗分级，细分级)

分析及鉴定

血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定

实验目的通过从血清中分离、纯化、鉴清白蛋白和γ 清白蛋白和γ-球蛋白的实验，培养学生综合应用盐析、离心、色谱、电泳分光等技术来分离纯化特定蛋白质的技能。

血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定

实验原理1. 初分级: 血清经饱和硫酸铵盐析后获得白蛋白初分级: 血清经饱和硫酸铵饱和硫酸铵盐析后获得白蛋白粗分离样品和球蛋白粗分离样品。

2. 脱盐:用凝胶色谱法除去分离样品中的盐类。脱盐: 凝胶色谱法除去分离样品中的盐类 3. 细分级: 用离子交换色谱法从白蛋白粗分离样细分级: 离子交换色谱法从白蛋白粗分离样品中提取纯化的白蛋白；从球蛋白粗分离样品提取纯化的γ 提取纯化的γ-球蛋白。

4. 鉴定: 用醋酸纤维薄膜电泳进行鉴定。鉴定:

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操1. 盐析

作

原理: 原理: 当高浓度盐存在时，蛋白质往往凝聚并析出沉淀。该技术为“盐析” 聚并析出沉淀。该技术为“盐析”。

不同的蛋白质在不同浓度的盐中形成沉淀。在半饱和硫酸铵溶液中，血清球蛋白会沉淀，经半饱和硫酸铵溶液中，血清球蛋白会沉淀，经离心后，可与白蛋白分离开。离心后，可与白蛋白分离开。影响因素：PH、温度、蛋白质纯度等。影响因素：PH、温度、蛋白质纯度等。逐渐改变硫酸铵浓度可分段盐析出不同的蛋白。

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操一、盐析

作

-- 白蛋白、γ球蛋白的粗分离白蛋白、 <1> 取0.5ml血清 0.5ml血清 0.5ml饱和饱和(NH 溶液， <2> 取0.5ml饱和(NH4)2SO4溶液，缓慢滴入，边加边摇。缓慢滴入，边加边摇。混匀后于室温中放置10分钟。 10分钟 <3> 混匀后于室温中放置10分钟。 8000r/min× <4> 8000r/min×10min 小心吸取上清液，作为纯化白蛋白用。 <5> 小心吸取上清液，作为纯化白蛋白用。沉淀加0.5ml蒸馏水，使之溶解， 0.5ml蒸馏水 <6> 沉淀加0.5ml蒸馏水，使之溶解，作为纯化 γ球蛋白用。蛋白用。

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2. 脱

盐

盐析后的粗分离样品中含有硫酸铵离子成分，样品中含有过高的离子浓度会影响离子交换层析的效果，所以在用离子交换层析进行细分级前需要脱盐。离子交换层析进行细分级前需要脱盐。凝胶色谱法是一个温和而又快速的脱盐方法，同时可将蛋白质转换到用于离子交换层析的低离子强度缓冲液中。

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凝胶过滤的原理

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洗脱液中蛋白质及盐分的检查取96孔板一块，上四排加20%磺基水杨酸，下 96孔板一块，上四排加20 磺基水杨酸， 20% 孔板一块三排加BaCl 三排加BaCl

2液。从下端管口取1滴洗脱液，滴于20 从下端管口取1滴洗脱液，滴于20%磺基水杨 20% 酸中，出现白色混浊或沉淀即有蛋白质析出，酸中，出现白色混浊或沉淀即有蛋白质析出，开始收集蛋白样品。开始收集蛋白样品。从下端管口取1滴洗脱液，滴于BaCl 从下端管口取1滴洗脱液，滴于BaCl2中，出现白色混浊或沉淀即有盐分析出，不再收集。白色混浊或沉淀即有盐分析出，不再收集。

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二、G-25凝胶层析脱盐 25凝胶层析脱盐(一)葡聚糖凝胶G-25层析柱的制备葡聚糖凝胶G 25层析柱的制备 (二)上样与洗脱：上样与洗脱：1、小心控制凝胶柱下端活塞，使柱上缓冲液面刚小心控制凝胶柱下端活塞，好下降到凝胶床表面( 好下降到凝胶床表面(注意不要使液面低于凝胶床表面以致空气进行凝胶床) 表面以致空气进行凝胶床)。 2、关紧下端出口，用滴管吸取盐析球蛋白液，小关紧下端出口，用滴管吸取盐析球蛋白液，心缓慢的加到凝胶床表面上( 心缓慢的加到凝胶床表面上(注意不要将凝胶粒中冲起或破坏凝胶床表面的平整) 冲起或破坏凝胶床表面的平整)。

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3、开下端出口，使样品进入凝胶床(刚好下降到开下端出口，使样品进入凝胶床( 凝胶床表面),关闭出口，小心加入适量pH6.5 ),关闭出口 pH6.5的凝胶床表面),关闭出口，小心加入适量pH6.5的 Ac缓冲液缓冲液。 0.02mol/L NH4Ac缓冲液。 4、放开，流速约20滴/分钟，立即收集并检测， 20滴分钟，立即收集并检测，放开，流速约20 20%磺基水杨酸检测到蛋白后收集三管 10滴三管， 20%磺基水杨酸检测到蛋白后收集三管，10滴/管。颜色最深而且无浑浊的管用于下一步操作。颜色最深而且无浑浊的管用于下一步操作。 5、 BaCl2检测出现白色混浊或沉淀即有盐分析出，检测出现白色混浊或沉淀即有盐分析出，不再收集。不再收集。 6、平衡再生：继续洗脱30ml。平衡再生：继续洗脱30ml 30ml。 7、白蛋白样品脱盐。 15滴/管，收集三管。收集三管三管。白蛋白样品脱盐。 15滴

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3. 纯

化

离子交换色谱是蛋白质提纯中得到最广泛应用的方法之一。它是以离子交换剂为固定相，利用蛋白带电部分与具有相反电荷的离子交换剂吸附强弱的不同，而将混合物中的不同蛋白进行分离的色谱技术。

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原理：离子交换剂具有带电荷的酸性基团或碱性基团作离子交换基团，通过静电作用与带有相反电荷的离子(反离子)结合。当流动相中存在其他相反电荷的离子时，就与结合在固定相交换基团上的反离子进行交换。

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阳离子交换剂具有带负电荷的酸性基团作为离子交换基团，能吸附流动相中的阳

离子。阴离子交换剂具有带正电荷的碱性基团作为离子交换基团，能吸附流动相中的阴离子。

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0.02M NH4ACAC- AC+ +

蛋白样品+ +- - + - ++ +

0.06-0.3M NH4AC

AC- AC+ +

AC- + AC-

+阴离子交换剂

AC-

AC- + AC-

- -

AC-

AC- γ-球蛋白带正电白蛋白, 白蛋白,α、β

NH4+

+ +得到纯化的γ 得到纯化的γ-球蛋白

球蛋白带负电球蛋白带负电

NH4+

得到纯化的白蛋白得到纯化的白蛋白

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三、纯化(阴离子交换层析) 纯化(阴离子交换层析)将脱盐后含球蛋白的溶液加于DEAE纤维阴离子交换柱上，将脱盐后含球蛋白的溶液加于DEAE纤维阴离子交换柱上， DEAE纤维阴离子交换柱上用0.02mol/L NH4Ac缓冲液洗脱， Ac缓冲液洗脱缓冲液洗脱，分管收集洗脱液。检测到蛋白后立即收集三管，10滴分管收集洗脱液。检测到蛋白后立即收集三管，10滴/管，球蛋白) 编号。(纯化的γ-球蛋白) 编号。(纯化的。( 继续洗脱30ml 继续洗脱30ml 将脱盐后含白蛋白的溶液加于柱上，用0.06mol/L NH4Ac洗 …… 此处隐藏：1573字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……

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