血凝和血凝抑制实验[1]

鸡新城疫抗体检测(微量法)血凝(HA)与血凝抑制(HI)试验

2013-8-28

主要内容一、实验目的 二、实验内容 三、实验原理 四、实验材料 五、实验方法与结果判定 六、注意事项 七、新城疫背景介绍2013-8-28

一、实验目的1、掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操 作方法和结果判定方法； 2、了解新城疫有关背景知识。

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二、实验内容1、血凝试验(HA)检测新城疫抗原；

2、血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体。

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三、实验原理1、血凝试验(HA)原理：某些病毒或病毒的血凝 素能选择性地使某种动物地红细胞发生凝集，这种 凝集红细胞的现象称为血凝(HA),也称直接血凝 反应。

病 毒 颗 粒2013-8-28

红 细 胞

2、血凝抑制试验(HI)原理：当病毒的悬液中加入 特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或 其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗 粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被 抑制，称为红细胞凝集抑制(HI)反应，也称血凝 抑制反应。抗原 抗体

I am late!2013-8-28

四、实验材料1、血凝板(2人/块); 2、新城疫标准抗原、阳性血清； 3、被检血清(1份); 4、1%红细胞悬液； 5、稀释液； 6、移液器(10~100ul, 2人/把); 7、枪头； 8、3.8%枸橼酸钠溶液、阿氏液； 9、5ml注射器一支/人。2013-8-28

五、实验方法与结果判定血凝试验(HA)1、在血凝板上第一排的1~12孔内各加入25ul生理盐 水；2、在第1孔内加入25ul病毒标准抗原，然后依次倍比 稀释至第11孔，最后弃25ul; 3、每孔加入1%鸡红细胞悬液25ul ; 4、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30min; 5、结果判定。2013-8-28

血凝效价测定孔 号 1 2 × 生 理 盐 水 抗 原 红 细 胞 25 2 4 × 25 3 8 × 25 4 16 × 25 5 32 × 25 6 64 × 25 7 128 × 25 8 256 × 25 9 512 × 25 10 1024 × 25 11 2048 × 25 12 红细 胞对 照 25

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结 果

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结果判定标准1、++++:红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 %凝集； 2、+++:红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75%凝集； 3、 ++ :红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即 50%凝集； 4、 + :红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25%凝集； 5、- :红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集；2013-8-28

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血凝价的判定以出现++(50%凝集)的抗原最高稀释 倍数为该抗原的血凝价(1:128)。 25ul 1:256稀释的

病毒抗原为该抗原的一 个血凝单位。稀释 倍数 结果 2× 4× 8× 16 × 32 × 64× 128 × + + + ++ 256 × + 512 × — 1024 × — 2048 × — 细胞 对照 —

++ ++

++ ++

++ ++

++ ++

++ ++

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血凝抑制试验1、将病毒抗原稀释成4个血凝单位(1/128×4=1:32) 2、在血凝板上1~12孔内各加入25ul生理盐水；

3、在第1孔内加入被检血清25ul ,然后倍比稀释至第 11孔，最后弃25ul;4、第1~12孔内加入4单位抗原25ul (第12孔为病毒对 照); 5、每孔加入1%鸡红细胞悬液25ul ;

6、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟；7、结果判定。2013-8-28

血凝抑制效价测定1 2 ×生理 盐水

2 4 × 25

3 8 × 25

4 16 × 25

5 32 × 25

6 64 × 25

7 128 × 25

8 256 × 25

9 512 × 25

10 1024 × 25

11 2048 × 25

12 病毒 对照 25

25

被检 血清4单 位抗 原 红细 胞 结果

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25+

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25++ ++

25-

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结果判定标准1、++++:红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100 %凝集； 2、+++:红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而 稍向孔底集中，即75%凝集； 3、 ++:红细胞形成一个环状，四周有下凝集块， 即50%凝集； 4、 +:红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四 周稍有凝集块，即25%凝集； 5、-:红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即 无凝集。2013-8-28

血凝抑制价的判定以出现完全抑制凝集(即不凝集) 的血 清最高稀释倍数为该血清的血凝抑制价 (1:4)。稀释 倍数 结果 2× 4× 8× 16 × 32 × ++ + 64× 128 × ++ ++ 256 × ++ ++ 512 × 1024 × 2048 × ++ ++ 血清对 照 —

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