脂肪酸提取和检测的方案

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固液比分别为 1:6,1:7,1:8, 1:9,1:10 微波功率 500W,提取时间 5min, 温度 50℃

海带粉碎成粉， 过筛

称取 250g 的海带粉装入 500ml 的大圆底烧 瓶，加入石油醚(乙醇、乙醚)用微波萃取 法提取脂肪酸，500ml 大圆底烧瓶称重

60℃

抽滤

滤液浓缩

称重

固液比分别为 1:6,1:7,1:8, 1:9,1:10 微波功率 500W,提取时间 5:00, 温度 50℃

滤渣继续提 取，提取 3 次

集中收集，一起 浓缩

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称 100ml 的空锥形瓶，称取 5g 的样品加入到 100ml 的锥形瓶中

加 10mL0.5mol/L 氢氧化钠— 乙醇溶液，在瓶口上插一小漏 斗，漏斗上再盖一块玻璃

沸水加热 1 小时

加入 10ml,0.5mol/L 的硫酸，在瓶 口上插一小漏斗， 漏斗上再盖一块玻 璃加人 10mL 蒸馏水

反应完成后移去漏斗，继续加热除 去乙醇。再加人 10mL 蒸馏水，加 热，使皂化物溶解成混合液。

加热 1 小时

加浓盐酸(约 5mL)使之 呈酸性加热，可见脂肪 酸呈油状浮于上层时， 用分液漏斗分开上下层

油状物分层，用分液漏斗分开上下 层，上次用热水重复洗涤三次，洗去 甘油、硫酸等，静置澄清，上清液即 为脂肪酸

上层用热水重复洗涤三次， 每次用 水 100m1, 除去混杂于脂肪中的无 机盐、甘油、盐酸等，静置澄清， 上清液即为脂肪酸

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称量两个 100ml 圆底烧 瓶中

加入 2g 经预 处理的样品 [1]

加 入 25ml,0.5mol/l 的 KOH-CH3OH,25ml 石油醚

加热 60℃, 处理 30min

冷却

加入甲醇 7ml 和 3-4 滴 BF3-乙醚

加入为处理的 2g 未经预处理的样 品

加入 25ml,10:1 的 浓硫酸-CH3OH

冷却后加入 25ml 饱和 NaCl 溶液至 中性，取上层清 夜，称重

加热 60℃, 处理 30min

加入 2ml 石油醚

再加蒸馏水至瓶颈，取出上清，再用 2ml 石油醚洗多次，合并上清，放入 小瓶中待测，称重

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参考文献：

[1]寇秀颖，于国萍. 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究. 《食品研究与开发》,2005, 26(2),起止页码

[2] 闰玉霞, 李平林, 蔡扬鹏, 李八方. 利用G C 一M S 测定不同甲醋化条件下沙蜚脂肪酸组成. 《中国海洋药物杂志》，2010，第29卷第6期

[3] 何勇，彭莺，黎军. 硫酸催化甲酯化气相色谱法测肥皂产品中的 脂肪酸分布及总脂肪物含量.《 顺德职业技术学院学报》,2011,7: 第9 卷第3 期

[4] 曾虹燕,李昌珠,蒋丽娟. 用GC-MS分析不同方法提取的茶油脂肪酸.《热带亚热带植物学报》，2005,13(3):271-274

[5] 蔡心尧, 尹建军. 海藻中多不饱和脂肪酸的测定方法《无锡轻工大.学学报》，1999，9：第18卷第5期

[6] 罗盛旭，梁振益，陈佩. 海带脂肪酸的提取及其成分分析.《海南大学学报自然科学》，2005，9：第23卷第3期

[7] 冯小峻，邓舟，陆慧宁等.GN海带新品系脂肪酸的气相色谱一质谱联用分析. 《中山大学学报》，2010，11：第49卷第6期

[8] 纪丽丽，宋文东，刘建秀. 红树林植物露兜中挥发油和脂肪酸的测定. 《现代食品科技》, 2008:V01．24，No．6

[9] 朱晓楠,魏士刚等. 微波辅助提取一气相色谱质谱联用测定肉桂中的挥发油. 《高等学校化学学报》，2009，7：V01．30，No．7，1300一1304

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1.脂肪化学名甘油三酯，脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和长短却不相同。脂肪酸分三大类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。 脂肪在多数有机溶剂中溶解，但不溶解于水。

2.多不饱和脂肪酸指含有两个或两个以上双键且碳链长度为18～22个碳原子的直链脂肪酸。通常分为omega－3和omega－6，在多不饱合脂肪酸分子中，距羧基最远端的双键在倒数第3个碳原子上的称为omega－3；在第六个碳原子上的，则称为omega－6

3.单不饱和脂肪酸,在分子结构中仅有一个双键；多不饱和脂肪酸,在分子结构中含两个或两个以上双键

脂肪转化为脂肪酸的方法：

1.脂肪在碱性溶液底下水解生成脂肪酸钠，然后加入硫酸，溶于水，不溶于乙醇。无水物是白色晶体或粉末，浓缩把乙醇蒸出，得到脂肪酸 脂肪酸

提取：称200g的海带粉，加入固液比为1:5的乙醇在50℃,500W的条件下用微波法提取，抽滤，取滤液静置，滤渣再加入1:4的乙醇溶剂进行二次提取，提取条件为50℃,500W的条件下进行,提取后抽滤，静置至一段时候后,充分析出白色固体后抽滤进行浓缩,在浓缩前可适当加入甲醇,再经行浓缩

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现象: 甲酯化： 酸化甲酯化

1.加入正己烷4 ml，浓度2 mol的氢氧化钾一甲醇溶液2 ml，剧烈振摇1—2 min，30度水浴反应20 min。加入三氟化硼-甲醇溶液，3 000 r／min离心10min。取上清液待测。

其中三氟化硼法能利用快速皂化使脂肪酸盐直接转化成脂肪酸甲酯，减少酸化提取手续

2.取1．3 g浸膏，加0．5mol·L～KOH-CH3OH溶液25 mL，苯一正己烷(体积比为1：1)溶液25 mL，室温下振荡5min后，加热至60℃，处理20 min，冷却后，加入饱和NaCI溶液25 mL，静置分层后取上层清液进行GC—MS分析。

3.样品5 g ，于小烧杯中，加入乙醚16.7mL，正己烷8.3mL，使脂肪完全溶解后转入250mL 容量瓶，加入甲醇25mL，再加入0.8mol/L 甲醇-KOH 溶液25mL，摇匀后静置10min。加蒸馏水至刻度，吸取上层溶液，待作GC-MS 分析。

气相条件：进样口温度270℃，温100℃，以10℃/min升到170℃保持1min 后，以3℃/min 升到250℃，保持4min；流速：恒流模式2.4mL/min，分流进样分流比为50:1。测定方法：将沙棘油进行氢氧化钾- 甲醇室温酯化法处理后进样分析，进样量0 . 2μL。按气相条

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件，用GC-MS 测定样品后得到色谱图。利用气质联用仪所带的标准图谱库的质谱数据进行自动检索，同时根据质谱图及相关文献鉴定出主要色谱峰对应的物质名称，并使用数据处理系统对色谱峰进行面积归一化处理，从而计算出各物质相对含量。

加入3-4滴BF3-乙醚溶液，将混合物放置在70℃的水浴中加热3分钟，冷却后，加入1ml正己烷，振摇使甲酯转入正己烷层

4.称取2．0 mg提取出的茶籽油于小样品瓶中，加入1．5 mL正己烷溶解油样，摇匀，加入60“L乙酸甲酯，摇匀静置10 min。用移液枪往每个小瓶中加入100“L 27 mg／mL甲醇钠甲醇溶液，在振荡器上振荡2 min，然后静置20 min以上使甲酯化完全，加入饱和草酸60¨L使甲酯化终止，摇匀静置于一24℃冰箱内20 min。取出，将样液通过无水硫酸钠微柱脱水，用小瓶收集滤液约1．2 mL上机测定。

5.取1ml样品,加2N的甲醇氢氧化钾溶液0.5ml,然后加10ml正庚烷在120度的温度下加热半小时就可以直接进样了.

也可以用比较复杂的方法进行,样品大约20克,无水甲醇50ml左右,加浓硫酸5ml,在不低于95度的水浴中回流六小时以上,然后萃取甲酯.萃取后甲酯用无水乙醇以1:3或1;5比列稀释后进样即可.

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6.加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止3~5min，取上层油样1ml于试样瓶中，进GC分析

脂肪酸甲酯化方法的选择。在对食物样品中的反式

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