第1章 组织培养技术的基本理论知识(新修)

组织细胞培养技术

司徒镇强

主讲：周晓霞

第一章 细胞培养的基本理论知识

组织细胞培养的诞生和发展简史组织培养工作开始于20世纪初，Harrison(1907) 最早对两栖类胚胎的神经管组织进行了悬滴培养 -

哈里森悬滴培养法真正开创大规模细胞培养工作是在 20世纪40年代， W.Earle 和 R.Dulbecco 设计出了细胞培养液配方， 并开始了单细胞的悬液培养，细胞培养工作才得 到广泛发展。细胞培养始传我国是20世纪30年代。至50年代以 后，组织培养已在我国逐步开展起来

第一节 细胞培养基本概念一、细胞培养(cell culture)基本概念： 动物细胞与组织培养是从动物体内取 出细胞或者组织，模拟体内的生理环境， 在无菌、适温和丰富的营养条件下，使 离体细胞或者组织生存、生长并维持结 构和功能的一门技术。

体外培养(In Vitro)

细胞培养 组织培养 器官培养

概念体 外 培 养 (

** 细胞培养 (cell culture):是把取得之组织用机械或消化的方法分散成单个细胞悬液，然后 进行培养生长。

** 组织培养 (Tissue culture):把活体的一小片组织置于底物上孵育，细胞自其周围移出并生长。

In vitro

)

**器官培养 (Organ culture):系将活体中器官或一部分器官取出，置于体外生存、生长并同时保 持其一定的结构和功能特征。

克隆羊多莉

克隆猴

单 克 隆 抗 体 制 备 过 程

二、细胞培养的优点与缺点

优点：1.活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、 结构、生命活动等

2.可控制： 选择对象：均一性、重复性 哪一种：类型：上皮？间质？ 性质：正常？肿瘤？ 阶段： 调节条件：物理、化学、生物等因素可控 研究方法：可采用各种研究技术、记录方法

3.应用广：学科多， 对象广。 4.较经济： 可提供大量、同时、重复性好的、生物 学性状相似的实验对象

细胞培养技术的主要优点(小结) ㈠ 研究的对象是活细胞。 ㈡ 研究的条件可以人为控制。 ㈢ 研究的样本，可以达到比较均一性。 ㈣ 研究的内容便于观察、检测和记录。 ㈤ 研究的范围比较广泛。 ㈥ 研究的费用相对较经济。

缺点：虽然现在人工模拟体内环境的技术已经很高,但人工所模拟的条件与体内实际仍不完全

相同。当细胞被臵于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中久了，必然发生变化。

1.与体内主要不同相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作

用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。 2.主要表现 失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显， 细胞趋向单一化； 3.提示 要正确认识体外培养细胞：是一种特定条件下生 长的细胞群体。

体内、外细胞

的差异:体内细胞：机体神经体液调节和其他类 型细胞影响基因表达受到外来信号调节 增殖过程中不断发生着分化 (由一般到特殊) 高度特化的结构和功能

体外细胞：失去机体神经体液调节和其他 类型细胞影响细胞的许多外来信号被切断

特定分化基因表达减弱或停止 而进化中保守的增殖活动维持 (由特殊到一般) 与体内细胞结构和功能的差异特征：失去原有形态，分化特性减 弱，形态和功能趋于单一，一定代 数后衰老死亡，或发生转化，获不 死性而成为能无限传代

第二节 组织培养的细胞生物学一、体外培养细胞的生长类型 按生长方式分为二型 粘附型细胞: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 悬浮型细胞: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态 下即可生长的细胞。 绝大多数有机体细胞属粘附型细胞。