肝糖原的提取和鉴定

肝糖原的提取和鉴定 一、实验目的

1、 学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。 2、 正确掌握使用离心机的方法步骤。 二、实验原理 三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。 2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后以2000r/min离心10min。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。 5、在沉淀内加入蒸馏水2ml，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。 （二）、鉴定

1、取2支小试管A、B，一支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加碘-碘化钾溶液1滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸3滴，试管乙加蒸馏水3滴，将两管在沸水浴中加热10min以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH溶液，并且PH试纸检验，直至溶液成中性。试管乙中加入同等滴数的蒸馏水。

3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察有无沉淀生成。 注意事项：

1、 实验小白鼠在实验前必须饱食。

2、 脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，

另一支手按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。 3、 肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。 4、 研磨应充分，这是实验成败的关键。

5、 离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。 6、 鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。 四、实验结果

试管A 棕红色

试管B 黄色 试管乙 无沉淀

试管甲 砖红色沉淀

分析：

1、 实验小白鼠在实验前必须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血

糖含量，肝糖原含量易于减少或耗尽。 2、 吸去肝脏附着的血液，可能是血液中含有还原性的葡萄糖，会影响后面糖原的鉴定。 3、 肝脏离体后，肝糖原会在酶的作用下迅速分解。所以肝脏必须迅速以三氯乙酸使蛋

白质变性以防其分解。

4、 研磨应充分，研磨使细胞破裂，肝糖原释放出来。研磨不充分会得不到糖原或含量

很少，影响后面的鉴定。加石英砂利于研磨。

5、 经第一次离心，蛋白质会沉于离心管底部糖原则留于溶液中。（上清液中）。

6、 糖原不溶于乙醇溶液，所以加入同体积的95%乙醇，混匀后，糖原会成絮状沉淀析

出。浑浊程度反映了糖原的多少。越浑浊，糖原越多。

7、 经第二次离心，糖原沉于离心管底部，糖原微溶于水，所以在加入蒸馏水后，沉淀

会在搅拌下溶解成糖原溶液。

8、 糖原为高分子化合物，与碘作用呈棕红色，所以试管A出现棕红色溶液。试管B

中为水，加入碘-碘化钾后，将仍为碘-碘化钾溶液的颜色，黄色。

9、 糖原无还原性，不会与班氏试剂在沸水浴中生成砖红色的Cu2O沉淀，所以试管乙

中仍为班氏试剂的颜色，蓝色，无沉淀。 10、 糖原会在浓盐酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有还原性的麦芽糖和葡

萄糖。还原性糖会在碱性条件下，班氏试剂与其在沸水浴下生成砖红色Co2O沉淀。班氏试剂为碱性溶液，所以须用20%NaOH溶液中和至中性。所以试管甲中会出现砖红色沉淀。 11、 班氏试剂中有CuSO4，NaCO3和柠檬酸钠。CO32-提供碱性环境，柠檬酸钠

为络合物，帮助Cu2+与葡萄糖反应，沸水浴下，Cu2+变为Cu+，即Cu2O，Cu2O为砖红色沉淀。葡萄糖被氧化为糖酸，麦芽糖亦如此。所以试管甲中有砖红色沉淀。 12、 结果表明，肝糖原被成功提取出来，且含量较多。