实验二、考马斯亮蓝法

实验二考马斯亮蓝法(Bradford法) 法 考马斯亮蓝法 测定蛋白含量

实验原理： 实验原理：酸性环境中，考马斯亮蓝 酸性环境中，考马斯亮蓝G-250可 可 和芳香族氨基酸结合， 以与 Arg和芳香族氨基酸结合，显蓝色。 和芳香族氨基酸结合 显蓝色。 最大吸收峰为595nm,颜色深浅与 ， 最大吸收峰为 蛋白质浓度成正比。 蛋白质浓度成正比。

操作步骤： 操作步骤：1.取8支试管，按下表加样(加样量：ml) 取 支试管 按下表加样(加样量： ) 支试管，管号 标准蛋白 未知样品 蒸馏水 G-250 10 1.0 4.0

20.02 0.98 4.0

30.04 0.96 4.0

40.06 0.94 4.0

50.08 0.92 4.0

60.10 0.90 4.0

71.00 0 4.0

81.00 0 4.0

2. 各管混匀后放置 分钟，于595nm测定 值， 各管混匀后放置5分钟 分钟， 测定A值 测定 用标准曲线法求未知蛋白浓度。 用标准曲线法求未知蛋白浓度。

注意事项： 注意事项：1. 比色尽量在一小时内完成，否则会有褪色 比色尽量在一小时内完成， 现象； 现象； 2. 比色后，比色杯和试管的染色用乙醇洗去。 比色后，比色杯和试管的染色用乙醇洗去。