生物制药工程课程论文(2)

可利用抗性筛选和蓝白斑法共同鉴定。

6.体外哺乳动物细胞中抗原表达的检测

分蛋白水平监测和核酸水平检测两种。蛋白水平检测方法有免疫沉淀法、Western杂交法、ELISA法三种，核算水平检测方法有Northern杂交法、逆转录

［２］PCR法两种。

7.疫苗接种方式与部位的确定

核酸疫苗的免疫接种方式又四种：肌内注射法，基因枪注射法，黏膜表层涂布法，静脉注射法。

8.动物模型的选择

根据不同疫苗可以选择不同动物模型。常见的有小鼠模型、兔子模型。禽流感核酸疫苗常用禽类模型。但由于核酸疫苗在大型动物和小型动物间有细微差

［７－９］别，也有使用大型动物为模型的选择方式。

9.免疫接种剂量、免疫周期和免疫次数的确定

核酸疫苗的接种剂量取决于能够诱发免疫应答反应的最低剂量。

理论上来讲核酸疫苗只需一次接种就可以是机体获得充足的免疫保护。但是由于大型动物细胞间隙较大，结缔组织丰富，大大影响了核酸疫苗的转染效率。

［２］因此，对大型动物而言，单次免疫往往达不到理想效果。

10.免疫佐剂的确定

佐剂因该是能增强特异性免疫应答的物质。根据疫苗种类不同，选择的佐剂有所不同。

以pcD-VP1 重组质粒与1%左旋咪唑LMS 混合免疫不同遗传背景的昆明白小鼠、Balb/C 小鼠和C57 小鼠,对照组只注射pcD-VP1。比较在不同遗传背景的小鼠上，LMS 对FMDV 核酸疫苗免疫效果的影响。结果发现LMS 既能增强体液免疫反应，又能增强细胞免疫反应，可以作为FMDV 核酸疫苗有效的化学佐剂。[10]

参考文献

[1]Daan J.A.Crommelin,Robert D.sindelar《制药生物技术》[M]化学工业出版社，2005.

[2]童望宇，章亭洲，傅向阳《制药微生物技术——基础与应用》[M]化学工业出版社，2006.

[3]吴庭才， 张春杰《核酸疫苗的特点、组成及在动物免疫中的应用》[D] 河南科技大学动物科技学院，2009.

[4]李颖、刘清河《核酸疫苗的研究进展》[J] 《吉林畜牧兽医》2005年第6期：9-13.

[5]但琨《核酸疫苗的研究进展》[D] 深圳市兽医卫生防疫检疫所，2003.

[6]石毅《核酸疫苗的研究进展》[D] 商丘师范学院，2006.

[7]陈光明、刘玉华《核酸疫苗制备工艺研究进展》[J] 《生物技术通讯》2006年第17卷第6期:964-966 [8]徐江红、王正敏、陈兵、章德广、戴文佳、朱美美、徐晨媚《肺炎链球菌自溶素核酸疫苗的制备及其免疫原性研究》[J]《中国眼耳鼻喉科杂志》2009年第4期:212-214

[9]李淑梅、杨帆、汤波《禽传染性支气管炎病毒脂质体核酸疫苗的制备》 [J]《 中国生物制品学杂志》2008年第21卷第3期：212-215

[10]任智慧.《新型佐剂对FMDV核酸疫苗免疫效果的影响》[D]新疆大学，2005.