昆明小鼠胚胎干细胞囊胚孵出前不同培养方法的效果比较

目的：胚胎干细胞的获得、克隆与传代对实验条件及操作技术水平要求较高。分别将单纯胚胎干细胞培养液法与KSOM-胚胎干细胞培养液法应用于昆明小鼠胚胎干细胞囊胚孵出前阶段,对体外培养的胚胎干细胞进行鉴定,并比较其增殖与克隆形成情况。方法：实验于2006-03/10在哈尔滨医科大学组织胚胎学教研室暨组织工程中心完成。①冲胚液配制：含体积分数为0.05胎牛血清的磷酸盐缓冲液,4℃

维普资讯 http://doc.guandang.net

中国组织工程研究与临床康复

。。 04- 1第卷第朋 i n i c a l Reh a i t a t i v eT i s s u eE n g i n e e r i n g Re se ar ch J o ur na l o f Cl b i l—

A p嚣 r“ 7 1 5 2 0 0 7 V o 1 . 1 1, N o . 1 5|| t|| | 。甏 ≮

基础医辱

t

毫 I

昆明小鼠胚胎干细胞囊胚孵出前不同培养方法的效果比较★鲍君红’,刘慧雯，王锦绣’’ De pa r t men t Hi s t ol o g y E mbr y ol o g y. Har bi n Chi n a; Mi n i s t wCo- c on s t r u c t i o n St at e

Co mpa r i s o n o f d i fe r e nt m e t ho ds t o c ul t u r e e m br yo n i c s t e m c e l l s p r i o r t o bl a s t oc y s t s ha t c hi n g i n Kunm i ng mi c eAb s t r ac t

o f a n d Ha r bi n

Me di c a l Un i v er s i t y . 1 50 0 8 6, 2 t h e B i ol O g y Pr ov i n e - c

AI M: T h e r e q u e s t s o f t h e e x p e r i me n t a l c o n d i t i o n a n d t h e o p e r a t i o n t e c h n i c a ll e v e I o f e mb r y o n i c s t e m c e l I( E S C)c o l l e c t i o n, c l o n e a n d p a s s a g e a r e M e r y h i g h . R e s p e ti c v e l y t o a p p l y t wo c u l t u r e me t h o d s t h a t s i mp l e e mb yo r n i c s t e m c e l l sc ul t ur e m e di a an d KSO M— e mb r y on i c s t e m ce l l s c u l t ur e m e di a c u l t i v a t e d bl as t o c y s t s d ur i n g b l as t o c y s t s h a t c h e d i n Kun

mi n g mi c e .t o i d en t i f y mo us e ESC i n t h e加 v i t r o e x p er i me n t,a n d t o c ompa r e t h e ESC p r o l i f e r a t i on an d c l on e. M咂 THODS:Th e e x p er i men t wa s c ar r i e d o u t i n t he Dep a r t me n t o f Hi s t ol og y an d Em b yol r og y,Har bi n Me di c aI Un i v er s i t y, 『 e .Ti s s u e En gi ne e r i n g C: en t e r f r 0 m Ma r ch t o Oc t o be r 2 0 06. p r e pa r a t i on of i mp ac t e m br yo cu l t u r e me di a:p h os p h a t e

H e i l o n g j i a n g P r o v i n c e .Me di c i n e

Ke y

L ab o r a t o y. r 1 5 0 08 6.

Har bi n Ch i n a

H e i ', eg j i a n g P ov r i n c e .

b u f『 e r 0 f 0 . 0 5 v o l u me f r a c t i o n f e t a I b o v i n e s e r u m ( F B S ), s t o r e d i n 4℃ r e f r i g e r a t o r . ②p r e p a r a t i o n o f K S OM: s t o c k s o l u t i o n wa s s t o r e d i n一 2 0℃ r e f r i g e r a t o r .B e f o r e a p p l i c a t i o n a d d i t i o n 1 g/ L b o v i n e s e um r a l b u mi n ( B S A) a n d 1 mL, Ls o d i u m p y r u v a t e . f i l t r a t i o n . v o l u me i n c r e a s e d t i l I 1 0 0 m L ⑧T ' o t a l l y 3 5 f e ma l e K u n mi n g mi c e a g e d 6— 8 we e k s we r e

Ba o J u n - h on g★ S t u d y i n g f or mas

t er s ' d e gr e e,De p ar t men t o f Hi s t o l o gy Emb yo r l g y o . Ha r bi n Ch i na a n d H ar bi n

s u p e r o v u l a t e d wi t h 7 . 5 I U o f p r e g n a n t ma r e’ s s e r u m g o n a d o t r o p h i n, t h e n 7 . 5 I U o f h u ma n c h o r i o n i c g o n a d o t r o p h i n( h CG)4 8 h ou r s I a t e r,1 5 f emal es ma t e d wi t h mal e a g e d 1 0 we e k s. da y t h at e mb ol us ha d be e n s ee n wa s t h ou g h t p r eg n an t 0. 5

Me d i c aI Un i v er s . 1 50 0 8 6.

d a y R e x t d a y mo r n i n g ( 4] R e s p e c t i v e l y a p p l i e d t wo c u l t u r e me t h o d s t h a t s i mp l e e mb r y r o n i c s t e m c e l l s c u l t u r e me d i a a n dKSO M— embr yo ni c s t e m c e l l s c u l t u r e me di a c u l t i v at e d 3 . 5 d’b l a s t oc ys t s . a n d t h e f or me r o nl y ap p l y i n g t h e ESC c u l t u r e med i u m t h a t cu l t u r e d b l a s t oc y s t s,t h e I a t t e r a p pl y i n g t h e KSOM t h at c u l t ur e d b l a s t o c y s t s an d t h en u s i n g t h e ESC c u l t u r e

H e i l o n g j i a n g P ov r i n e. c

b a o j u n h o n g一 2 0 0 4@1 2 6. c o m Co r r e s p on d en e t c o: L i u Hui - we n. Do c t or , P of r es so r . Dep a tme r

n t o f Hi s t o l g y o an d

me d i u m i n s t e a d o f K SOM t o h a t c h b l a s t o c y s t s .⑤B l a s t o c y s t s w e r e c u l t i v a t e d o n mo u s e e mb yo r n i c f i b r o b l a s t f e e d e r l a v e r .

I n n e r c e l I ma s s f I CM) wa s i s o l a t e d b y e n z y me— me c h a n i al c me t h o d t o o b s e r v e e f i c i e n c y o f c l o n e s p n ma r y p a s s a g e o f E S C a n d a mo u n t p a s s a g e I CM.⑥E S C wa s i d e n t i i f e d b y Oc t - 4 s t a i n i n g a n d a l k a l i n i t y p h o s p h a t a s e( AK P) s t a i n i n g a n d加v i t r o d i fer en t i a t i o n a bi l i t y.

R E S U L TS:, 1 ) e f e c t s o f d i f f e r e n t c u l t u r e s y s t e ms o n c o n d i t i o n o f h a t c h e d b l a s t o c y s t s: K S OM— e mb yo r n i c s t e m c e l l s c u l t u r es ys t e m: At r i u m o f b l a s t oc y s t s du r i n g I CM i n KSO M dr op g r a du a l l y e n l ar g e d, a n d en l ar ge men t e mb yo r wa s s u f f i c i en t

Embr yol o g y,Ha r b i n Ch i na; Me di c i ne

Har bi n

Me di c al Un i v er s i t y. 1 50 0 8 6. t h e Bi ol gy o

w h e n i t w a s t a k e o u t o f . Pr o j e c t u r e o n e b u l l a e 0 n s u r f a c e b u t n o t b r e a k t h r o u

g h z o n a p e l l u c i d a .t h i s wa s h a t c h i n gb l as t o c y s t s . Bl a s t oc y s t s c o n t a i n e …… 此处隐藏：8008字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……